Питательная селективная среда HiMedia M015-100G Основа среды Хойла предназначена для выделения и дифференциации типов Corynebacterium diphtheriae из клинических и не клинических образцов. Среда применяется для микробиологического анализа мазков из зева, носа и ран; после добавления крови и теллуритовой добавки инкубацию отрицательных образцов проводят до 72 ч.

Назначение

Основа среды Хойла — высокоселективная питательная среда для выделения и дифференциации типов Corynebacterium diphtheriae из клинических и не клинических образцов.

Типы образцов:

• мазок из зева;
• мазок из носа;
• мазок из раны.

Среду Хойла рекомендуется использовать совместно с неселективными средами:

• сывороточной средой Лёффлера (M537);
• основой кровяного агара (M089) с добавлением 10 % крови лошади.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Эквивалент экстракта говядины.

Конечный pH при 25 °C: 7,8 ± 0,2.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 40,0 г сухой среды в 940 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление 15 фунтов на квадратный дюйм соответствует ориентировочно 0,10 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 50 мл лизированной крови и 10 мл 3,5%-ной селективной добавки PTe — по 1 мл на флакон (FD047).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Наиболее распространённое заболевание, вызываемое Corynebacterium diphtheriae, — дифтерия. Это острое инфекционное заболевание, проявляющееся местным поражением верхних дыхательных путей и системным действием токсина, наиболее выраженным на сердце и периферических нервах.

Основа среды Хойла, разработанная Хойлом, представляет собой модификацию исходной рецептуры Нейлла для выделения и дифференциации C. diphtheriae. В отличие от исходной рецептуры, среда не подавляет рост некоторых типов Corynebacterium группы mitis.

Пептон и HM-пептон B обеспечивают поступление углерода, азотистых соединений, аминокислот, витаминов и других необходимых питательных веществ для роста. Теллурит калия является селективным агентом: он подавляет большинство представителей нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей, за исключением Corynebacterium.

• C. diphtheriae* обычно присутствуют в небольшом количестве, что позволяет получать хорошо изолированные колонии. Поэтому посев выполняют непосредственным растиранием тампона по всей поверхности среды.

При отрицательном результате инкубацию следует продолжать до 72 ч. Для изучения морфологии выполняют окрашивание генциановым фиолетовым. Для выявления характерной морфологии и особенностей окрашивания C. diphtheriae методом Нейссера или Альберта рекомендуется использовать колонии со среды Лёффлера. Токсигенность штаммов C. diphtheriae определяют методом Элека.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после добавления 50 мл лизированной крови и раствора теллурита, после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Примечание: ранее Bacillus spizizenii обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды:
  • базальная среда: гель янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий;
  • после добавления крови и теллурита: в чашках Петри образуется непрозрачный гель коричневато-красного цвета.
• Реакция: реакция 4,0%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,60–8,00.
• Конечный pH: 7,8 ± 0,2.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Только для применения в диагностике in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

• Каждая серия среды проверяется на стандартных организмах, указанных в сертификате анализа. Изоляты, полученные из больничных образцов, могут демонстрировать различный рост в зависимости от потребностей в питательных веществах.
• Для подтверждения результата необходимо выполнить биохимические и серологические тесты.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде. Гигроскопичность продукта может приводить к образованию комков. Неправильное хранение также может стать причиной комкования.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении