Готовая двухсекционная чашка с кровяной и маннитол-солевой агаровыми средами HiCombi™ HiMedia HB009-20PT (20 чашек) содержит по 10 мл каждой среды. Применяется для выделения Neisseria, требовательных микроорганизмов и потенциально патогенных грамположительных бактерий, прежде всего стафилококков; хранится при 2–8 °C.

Назначение

Среда рекомендована для выделения Neisseria и других требовательных микроорганизмов, а также потенциально патогенных грамположительных микроорганизмов, особенно патогенных стафилококков. Образцы для исследования: клинический материал (гной, моча), пищевые и молочные образцы.

Состав

Кровяная агаровая основа

Формула скорректирована и стандартизована с учётом показателей эффективности.

Эквивалент пептона из говяжьего сердца.

Маннитол-солевой агар

Формула скорректирована и стандартизована с учётом показателей эффективности.

Эквивалент говяжьего экстракта.

Принцип действия и интерпретация

Кровяная агаровая основа

Кровяная агаровая основа — питательная среда, обычно используемая в качестве основы для приготовления кровяного агара с добавлением крови. Её также применяют как универсальную среду без добавления крови. С добавлением фосфата фенолфталеина среду используют для выявления стафилококков, продуцирующих фосфат (1); с добавлением соли и агара — для оценки поверхностного загрязнения оборудования и туш свиней (2); также её применяют для определения диапазона солёности, переносимого морскими Flavobacteria (3), и приготовления антигенов Salmonella Typhi (4). Кровяная агаровая основа рекомендована APHA (5) и стандартными методами (6, 7) для исследования пищевых образцов.

Пептон HM B и триптоза обеспечивают микроорганизмы источниками углерода и азота, аминокислотами и витаминами. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Добавление крови повышает питательность среды за счёт факторов роста, необходимых требовательным микроорганизмам, и позволяет визуализировать гемолитические реакции. Характер гемолиза зависит от вида используемой крови. Овечья кровь обеспечивает наилучшие результаты при работе с Streptococci группы A (8), но не поддерживает рост Haemophilus haemolyticus из-за недостатка пиридиновых нуклеотидов. При использовании лошадиной крови колонии H. haemolyticus образуют гемолиз и могут имитировать Streptococcus pyogenes (9).

Маннитол-солевой агар

Стафилококки широко распространены в природе, но преимущественно обитают на коже, в кожных железах и на слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительный вид Staphylococcus aureus известен как условно-патогенный микроорганизм человека. Способность свёртывать плазму остаётся наиболее широко используемым и признанным критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями (9). Стафилококки обладают характерной способностью расти на средах с высоким содержанием соли (10). Выделение коагулазоположительных стафилококков на фенол-красно-маннитоловом агаре с добавлением 7,5 % NaCl изучал Чапман (11).

Маннитол-солевой агар рекомендован для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов (5, 9, 12, 13, 15). Добавление эмульсии яичного желтка FD045 позволяет выявлять липазную активность Staphylococcus aureus: вокруг колоний образуются жёлтые непрозрачные зоны (16). Пептон HM B и протеозный пептон обеспечивают растущие бактерии необходимыми факторами роста и микроэлементами. Хлорид натрия подавляет рост бактерий, отличных от стафилококков. Маннитол служит ферментируемым углеводом; его ферментация приводит к образованию кислоты, которую выявляют по изменению окраски индикатора фенолового красного.

Staphylococcus aureus ферментирует маннитол: образуются жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Коагулазонегативные штаммы S. aureus обычно не ферментируют маннитол, поэтому формируют розовые или красные колонии, окружённые красно-фиолетовыми зонами. Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии S. aureus необходимо подтверждать коагулазным тестом в пробирке или на предметном стекле (9). Липазную активность S. aureus выявляют, дополняя среду эмульсией яичного желтка.

Предположительное наличие S. aureus необходимо подтверждать коагулазным тестом. Перед исследованием на коагулазу или другими диагностическими тестами микроорганизм следует пересевать на менее ингибирующую среду без избытка соли, например на питательный бульон (M002), чтобы избежать возможного влияния соли (16). Некоторые штаммы S. aureus могут ферментировать маннитол с задержкой. Поэтому отрицательный результат следует проверить после дополнительной инкубации в течение 24 ч, прежде чем считать его окончательным (16).

Методика посева

1. Асептически нанесите штриховым способом исследуемый инокулят в количестве 50–100 КОЕ.

Контроль качества

Внешний вид и характеристики сред

• Внешний вид: стерильные кровяной и маннитол-солевой агары в одноразовой двухсекционной чашке диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет кровяной агаровой основы: красный.
• Цвет маннитол-солевого агара: красный.
• Объём каждой среды в двухсекционной чашке: 10 мл.
• pH кровяной агаровой основы: 7,10–7,50.
• pH маннитол-солевого агара: 7,20–7,60.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.