Питательная селективная агаровая среда Агар маннит-солевой HiMedia GMH118-500G (500 г), производства HiMedia, представляет собой гранулированную среду для микробиологического анализа. Агар маннит-солевой HiMedia GMH118-500G применяют для селективного выделения стафилококков из фармацевтических образцов; содержание хлорида натрия в составе составляет 7,5 %.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения стафилококков из фармацевтических продуктов при проведении испытания на микробиологические пределы по гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Состав

Пептический перевар тканей животного происхождения

Панкреатический перевар казеина

Эквивалент экстракта говядины

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию из 111,02 г сухой гранулированной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (примерно 0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин либо по валидированному циклу стерилизации.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Среда содержит 7,5 % хлорида натрия. При многократном контакте с воздухом и поглощении влаги хлорид натрия может образовывать комки, поэтому среду следует хранить в плотно закрытой таре в сухом месте, защищённом от яркого света.

Принцип действия и интерпретация результатов

Стафилококки широко распространены в природе и преимущественно встречаются на коже, кожных железах и слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительные виды, в частности Staphylococcus aureus, являются хорошо изученными условно-патогенными микроорганизмами человека. Способность свёртывать плазму остаётся широко применяемым и признанным критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями.

Стафилококки обладают способностью расти на средах с высоким содержанием соли. Выделение коагулазоположительных стафилококков на маннитно-фенол-красном агаре с добавлением 7,5 % NaCl было изучено Чепменом. Полученная маннитно-солевая агаровая основа предназначена для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов.

Дополнительное свойство Staphylococcus aureus — липазную активность — можно выявлять при добавлении эмульсии яичного желтка FD045. Липазная активность визуализируется в виде жёлтых непрозрачных зон вокруг колоний. Среда также используется при проведении испытаний на микробиологические пределы для селективного выделения стафилококков. Рецептура соответствует гармонизированным методикам USP/EP/BP/JP/IP.

Пептон HM B, триптон и пептон обеспечивают среду питательными веществами: источниками углерода и азотистых соединений, аминокислотами с длинной цепью, витаминами, другими факторами роста и микроэлементами. Многие бактерии, кроме стафилококков, подавляются хлоридом натрия в концентрации 7,5 %. Маннит является сбраживаемым углеводом; его ферментация приводит к образованию кислоты, выявляемой индикатором феноловым красным.

Staphylococcus aureus сбраживает маннит, образуя жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Коагулазоотрицательные штаммы S. aureus обычно не сбраживают маннит, поэтому формируют колонии от розового до красного цвета, окружённые красно-фиолетовыми зонами. Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии S. aureus необходимо подтвердить постановкой коагулазного теста в пробирке или на предметном стекле.

Липазную активность S. aureus можно выявлять добавлением эмульсии яичного желтка. Предположительно выявленный S. aureus необходимо подтвердить коагулазным тестом. Кроме того, микроорганизм следует пересевать на менее ингибирующую среду, не содержащую избыток соли, чтобы избежать возможного влияния соли на коагулазный тест или другие диагностические тесты, например на питательный бульон M002.

Некоторые штаммы S. aureus могут демонстрировать замедленную ферментацию маннита. Поэтому отрицательные результаты перед выбраковкой следует повторно инкубировать ещё 24 ч.

Тип образца

Фармацевтические образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов следует применять соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам USP/EP/BP/JP/IP.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

Перед открытием контейнера прочитайте этикетку. При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами. При обращении с образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда является селективной; некоторые штаммы Staphylococcus aureus могут демонстрировать замедленную ферментацию маннита.
2. Микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут демонстрировать различные характеристики роста на среде.
3. Каждая партия среды испытана с микроорганизмами, указанными в сертификате анализа (COA). Для любого специфического микроорганизма, не указанного в COA, рекомендуется валидировать среду самостоятельно с учётом конкретных требований пользователя.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтая или розовая гранулированная среда.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

pH

7,20–7,60.

Испытание стимулирования роста

Стимулирование роста проводили в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч. Степень восстановления принимают равной 100 % для роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростостимулирующие свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным для испытанной и одобренной партии среды, происходит при указанной температуре за период, не превышающий минимально установленный, при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C в течение ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Колонии сопоставимы по внешнему виду и индикаторной реакции с колониями, ранее полученными для испытанной и одобренной партии среды, при указанной температуре в течение периода, соответствующего установленному диапазону, при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Ингибирующие свойства

Рост тестируемого микроорганизма отсутствует при указанной температуре в течение периода не менее максимального установленного, при посевной дозе ≥10³ КОЕ и инкубации при 30–35 °C в течение ≥72 ч.

Дополнительные микробиологические испытания