Агар XLD (ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар) HiMedia GMH031-500G (500 г)

Селективная и дифференциальная питательная среда Агар XLD (ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар) HiMedia GMH031-500G (500 г) — гранулированная обезвоженная среда для микробиологических исследований. Агар XLD применяют для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов рода Salmonella из фармацевтических образцов; при приготовлении среду нельзя нагревать в автоклаве.

Назначение

Агар XLD рекомендован как селективная среда для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов рода Salmonella из фармацевтических продуктов при испытаниях на микробиологические пределы по гармонизированной методике USP, EP, BP, JP и IP.

Среда также используется для селективного выделения и идентификации кишечных патогенов, особенно Shigella, из образцов кала, а также для фармацевтических испытаний и контроля нестерильных продуктов на наличие или отсутствие Salmonella после обогащения в бульоне Раппапорта—Вассилиадиса для обогащения Salmonella MH1491.

Тип образцов

• Фармацевтические образцы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,8 г гранулированной обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до кипения среды.
3. Не нагревайте среду в автоклаве.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню, нагретую до 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не рекомендуется готовить большие объёмы среды: для них требуется более длительное нагревание, что может привести к образованию осадка.

Небольшое выпадение осадка возможно и является свойством среды; оно не влияет на рабочие характеристики препарата.

Принцип действия и интерпретация

Enterobacteriaceae — семейство грамотрицательных неспорообразующих палочек, включающее более 100 видов бактерий, обычно обитающих в кишечнике человека и животных. Представители нормальной кишечной микрофлоры называются колиформными бактериями. К клинически значимым родам семейства Enterobacteriaceae относятся Cedecea, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Ewingella, Hafnia, Klebsiella, Kluyvera, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia.

Salmonella представляет наиболее сложную группу среди Enterobacteriaceae. Инфицирование человека бактериями рода Salmonella чаще всего происходит при употреблении пищи, воды или молока, загрязнённых экскрементами человека или животных.

Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар является селективной и дифференциальной средой, разработанной Taylor для выделения и идентификации кишечных патогенов, прежде всего Shigella, из образцов кала.

Дезоксихолат натрия, аммония железа цитрат и натрия тиосульфат подавляют рост грамположительных микроорганизмов и выполняют функцию селективных компонентов. Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами и факторами роста.

Ксилоза, сахароза и лактоза являются сбраживаемыми сахарами среды. Ксилозу сбраживают почти все кишечные бактерии, кроме Shigella, что позволяет дифференцировать Shigella и Salmonella. Бактерии рода Salmonella метаболизируют ксилозу и декарбоксилируют лизин, в результате чего pH среды смещается в щелочную область и формируется реакция, имитирующая реакцию Shigella.

Для предотвращения аналогичной реакции у лизинположительных колиформных бактерий в среду добавлены повышенные количества лактозы и сахарозы. Их сбраживание приводит к образованию кислоты, поэтому непатогенные микроорганизмы, продуцирующие H₂S, не декарбоксилируют лизин.

Натрия тиосульфат способствует реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении. Натрия тиосульфат является субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющей его с образованием H₂S. Натрия тиосульфат и аммония железа цитрат служат индикаторами образования H₂S в среде.

Натрия тиосульфат также инактивирует галогены, ртутные соединения и альдегиды, снижая их возможную токсичность в исследуемом образце при проведении испытаний на микробиологические пределы. Натрия хлорид поддерживает осмотическое равновесие среды. Феноловый красный является индикатором pH.

Сбраживание сахаров протекает одновременно с их деградацией и сопровождается образованием кислот. В результате индикатор pH изменяет оттенок, а цвет колоний и среды при длительной инкубации меняется с красного на жёлтый.

Образование сероводорода приводит к появлению колоний с чёрными центрами в щелочных условиях. Образование кислоты при сбраживании углеводов может подавлять эту реакцию. Щелочная реакция вызывает обратное изменение цвета среды на красный.

Среда предназначена для скрининга образцов со смешанной флорой кишечных патогенов: обильный рост других видов не скрывает наличие Salmonella и Shigella.

Требования к образцам и обращению

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим методическим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на среде.
• Каждая серия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При работе с другими микроорганизмами рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.
• Возможно небольшое выпадение осадка; это свойство среды не влияет на её рабочие характеристики.
• Некоторые штаммы Proteus могут придавать большинству колоний окраску от красной до жёлтой, при этом у колоний часто формируются чёрные центры, что может приводить к ложноположительным реакциям.
• Неиэнтеробактерии, такие как Pseudomonas и Providencia, могут образовывать красные колонии.
• S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут образовывать красные бесцветные по H₂S колонии, напоминающие виды Shigella.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Гранулированная среда светло-жёлтого или розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

pH

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Стимуляцию роста проводят в соответствии с гармонизированной методикой USP, EP, BP, JP и IP. Культуральные характеристики оценивали после инкубации при 30–35 °C в течение установленного времени. Коэффициент восстановления принимают равным 100 % относительно роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростовые свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным на проверенной и одобренной серии среды, наблюдается при заданной температуре в течение периода, не превышающего минимальное указанное время, при внесении посевной дозы ≤100 КОЕ: 30–35 °C, ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Внешний вид колоний и индикаторная реакция сопоставимы с результатами