Основа бульона Мюллера-Кауфмана с тетратионатом HiMedia GM876-500G (500 г)

Гранулированная основа питательной среды «Основа бульона Мюллера-Кауфмана с тетратионатом HiMedia GM876-500G (500 г)» предназначена для приготовления селективного бульона. Основа применяется для селективного обогащения и выделения Salmonella из пищевых продуктов, однако не поддерживает рост Salmonella Typhi, Salmonella Sendai и Salmonella Pullorum.

Назначение и область применения

Основа бульона Мюллера-Кауфмана с тетратионатом используется для приготовления селективной жидкой питательной среды при анализе пищевых продуктов на наличие Salmonella. Методика предназначена для образцов с низкой концентрацией Salmonella и микроорганизмами, находящимися в физиологически ослабленном состоянии после воздействия неблагоприятных факторов при переработке или хранении продуктов.

Среда применяется для:

• предварительного неселективного обогащения и восстановления повреждённых клеток Salmonella;
• последующего селективного обогащения культуры в тетратионатном бульоне;
• выделения Salmonella из мяса и мясных продуктов, птицы и продуктов из птицы;
• выделения Salmonella из фекалий животных и воды, загрязнённой сточными водами.

Основа соответствует требованиям ISO к бульону Мюллера—Кауфмана с тетратионатом и применяется в соответствии с назначением среды, указанным для санитарно-бактериологического контроля.

Состав

Формула откорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Предварительное обогащение в неселективном бульоне способствует восстановлению повреждений клеток Salmonella, разбавлению токсичных или ингибирующих веществ и размножению целевых микроорганизмов. Обычно культуры предварительного обогащения инкубируют при 35–37 °C в течение 18–24 ч, после чего часть культуры пересевают в один или несколько селективных бульонов обогащения.

Как правило, 1 мл культуры после предварительного обогащения вносят в 9 мл селективного бульона обогащения. Селективные среды содержат компоненты, которые обеспечивают пролиферацию Salmonella и подавляют рост конкурирующих микроорганизмов, не относящихся к Salmonella.

Для предварительного обогащения Salmonella из пищевых продуктов нормативами BAM рекомендован лактозный бульон M1003. Селективное обогащение проводят в тетратионатном бульоне и среде Раппапорта—Вассилиадиса. Для выявления пищевых Salmonella применяют различные модификации тетратионатного бульона. Использование более одного селективного бульона повышает вероятность выделения Salmonella из образцов, содержащих несколько серотипов (5).

Мюллер рекомендовал тетратионатный бульон для селективного выделения Salmonella (1). Кауфман модифицировал рецептуру, включив бычью желчь и бриллиантовый зелёный в качестве селективных агентов для подавления бактерий, включая виды Proteus (2). Британская стандартная спецификация предусматривает применение тетратионатного бульона с бриллиантовым зелёным для выделения Salmonella из мяса, мясных продуктов, птицы и продуктов из птицы (3). Среда также рекомендована для селективного выделения Salmonella из фекалий животных и воды, загрязнённой сточными водами (4).

Селективность среды обеспечивается тетратионатом, образующимся в результате реакции тиосульфата и йода. При необходимости для подавления видов Proteus в бульон можно добавить новобиоцин из расчёта 4 мг/л (6).

Функции компонентов среды:

• ферментативный гидролизат казеина и папаиновый перевар соевой муки являются источниками углерода, азота, витаминов и минеральных веществ;
• бычья желчь и добавленный бриллиантовый зелёный подавляют грамположительные и другие грамотрицательные микроорганизмы;
• карбонат кальция выполняет функцию буфера;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• тиосульфат натрия служит источником серы;
• анионы тетратионата S₄O₆ являются основным селективным агентом среды обогащения.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 82,05 г основы в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию только до начала кипения.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите приготовленную основу.
5. Непосредственно перед использованием в асептических условиях добавьте 19 мл раствора йода, приготовленного из 20 г йода и 25 г йодида калия в 100 мл стерильной дистиллированной воды.
6. Добавьте 9,5 мл 0,1%-ного раствора бриллиантового зелёного.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду по стерильным пробиркам, обеспечивая равномерное распределение карбоната кальция.

Из-за присутствия карбоната кальция приготовленная среда образует опалесцирующий раствор с белым осадком.

Методика анализа пищевых продуктов

1. Внесите приблизительно 10 г образца в 100 мл приготовленного бульона.
2. Тщательно встряхните.
3. Поместите колбу на 15 мин в водяную баню при 45 °C.
4. Перенесите колбу в инкубатор или водяную баню с температурой 43 °C.
5. Инкубируйте 18–24 ч и 48 ч.
6. После инкубации выполните пересев на модифицированный агар с бриллиантовым зелёным M016.

Исследования показали, что инкубация селективной культуры обогащения при 43 °C повышает выделение Salmonella (8).

Ограничения применения и подтверждение