HiMedia GM868-500G Железо-сульфитный агар

Гранулированная питательная среда HiMedia GM868-500G Железо-сульфитный агар предназначена для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов. Среда применяется для анализа образцов пищевых продуктов с инкубацией при 55–56 °C в течение 24–48 ч и поставляется в упаковке массой 500 г.

Назначение

Железо-сульфитный агар применяют для выявления термофильных анаэробных микроорганизмов, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов.

Тип образца: пищевые продукты.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 26 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Железо-сульфитный агар представляет собой модификацию сульфитного агара Кэмерона, разработанного Национальной ассоциацией производителей консервов США.

В исходной формуле концентрация сульфита составляла 0,1 %, что ингибировало некоторые штаммы Clostridium sporogenes. Концентрация сульфита 0,05 % не оказывает ингибирующего действия на исследуемые микроорганизмы.

Большинство клостридий имеют сульфитредуктазу в цитоплазме, но не способны выводить этот фермент наружу. При образовании сероводорода H₂S из сульфита он реагирует с солью железа(III), в результате чего образуется сульфид железа и формируются осадки, окрашивающие колонии в тёмный, преимущественно чёрный цвет.

Триптон обеспечивает микроорганизмы азотом и другими питательными веществами, необходимыми для роста. Сульфитредуцирующие бактерии обычно образуют чёрные колонии вследствие восстановления сульфита до сульфида, который реагирует с солью железа(III).

Некоторые грамотрицательные бактерии также способны восстанавливать сульфит с образованием сульфида железа. В таких случаях ферменты находятся вне клеток, поэтому темнеет весь объём среды, что делает подсчёт колоний невозможным.

Методики выявления микроорганизмов

Метод глубинного посева с перемешиванием

1. Разлейте среду в пробирки порциями по 10 мл.
2. Внесите исследуемый образец, когда температура среды составляет приблизительно 50 °C.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55 °C в течение 24–48 ч.
5. Оцените наличие характерных чёрных колоний в толще среды.

Типичный термофильный вид Desulfotomaculum nigrificans образует в толще среды отдельные чёрные сферические колонии.

Метод Аттенборо и Скарра

1. Разбавленные образцы сахара или другого пищевого продукта профильтруйте через мембранные фильтры.
2. Сверните мембранные фильтры и поместите их в пробирки с таким количеством железо-сульфитного агара при 50 °C, которого достаточно для полного покрытия фильтров.
3. Дайте среде застыть.
4. Инкубируйте при 55–56 °C в течение 24–48 ч.
5. После инкубации подсчитайте количество чёрных колоний на мембранном фильтре.
6. Проведите подтверждающие тесты для идентификации микроорганизмов, выросших на среде.

Мембранно-фильтрационный метод позволяет быстрее исследовать образцы, сохраняет сопоставимую точность и подходит для анализа образцов большего объёма. Почернение среды является только предположительным признаком роста клостридий; для идентификации необходимо провести подтверждающие тесты.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или желтовато-коричневый однородный гранулированный порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется жёлтый слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 2,6 % масс./об., определённая при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2.

pH

6,90–7,30.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агаровая питательная среда
• Форма выпуска: гранулированная
• Физическая форма: гранулы
• Масса: 500 г
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2
• Рабочий диапазон pH: 6,90–7,30

Пробоотбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов используйте соответствующие методики отбора и подготовки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Железо-сульфитный агар является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
2. Для подтверждения результатов необходимо дополнительно провести биохимические тесты.