HiMedia GM868-500G Железо-сульфитный агар

Сухая питательная среда HiMedia GM868-500G Железо-сульфитный агар для выявления термофильных анаэробных организмов. Применяется для обнаружения бактерий, вызывающих сульфидную порчу пищевых продуктов; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Железо-сульфитный агар является модификацией агара Кэмерона, разработанной Национальной ассоциацией консервщиков Америки. Среда оптимизирована по концентрации сульфита (0,05 %), что исключает ингибирование роста некоторых штаммов Clostridium sporogenes.

Большинство клостридий содержат сульфитредуктазу в цитоплазме, но не способны выводить её наружу. При восстановлении сульфита до H₂S в присутствии цитрата железа образуется осадок сульфида железа, из-за чего колонии окрашиваются в чёрный цвет. Триптон обеспечивает азот и другие питательные вещества, необходимые для роста бактерий.

Методика проведения анализа

Для обнаружения организмов, вызывающих сульфидную порчу, применяют два метода:

Метод глубокого посева (Deep-Shake Culture Method)

1. Разлить среду в пробирки порциями по 10 мл.
2. Внести пробу в среду, когда её температура составляет около 50 °C.
3. Дать среде застыть и инкубировать при 55 °C в течение 24–48 часов.
4. Результат: типичные термофильные виды, такие как Desulfotomaculum nigrificans, образуют отчетливые чёрные сферические колонии в толще среды.

Метод Аттенборо и Скарра (Attenborough and Scarr Method)

1. Разбавленные пробы сахара или других пищевых продуктов фильтруют через мембранные фильтры.
2. Фильтры сворачивают в рулон и помещают в пробирки, содержащие достаточное количество железо-сульфитного агара (при температуре 50 °C), чтобы полностью покрыть фильтр.
3. Дать среде застыть и инкубировать при 55–56 °C в течение 24–48 часов.
4. После инкубации подсчитывают количество чёрных колоний на мембранном фильтре.

Важное примечание: Почернение является лишь предварительным доказательством роста клостридий. Для окончательной идентификации необходимо провести подтверждающие биохимические тесты. Некоторые грамотрицательные бактерии также способны восстанавливать сульфит, однако в этих случаях ферменты являются внеклеточными, и вся среда темнеет, что делает подсчёт колоний невозможным.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 26 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 lbs) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры:

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Вид: однородный гранулированный порошок от светло-жёлтого до коричнево-жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: жёлтый, слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: pH 7,1 $\pm$ 0,2 (для 2,6 % водного раствора при 25 °C).
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробных условиях после инкубации при 55–56 °C в течение 24–48 часов.

Область применения и ограничения

• Тип образцов: пробы пищевых продуктов.
• Ограничения: среда общего назначения и может не поддерживать рост требовательных (fastidious) организмов. Для подтверждения результатов обязательны дополнительные биохимические тесты.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении, защищённом от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; неправильное хранение может привести к образованию комков.

Меры предосторожности и утилизация

• При работе использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической лабораторной практики.
• Загрязнённые материалы и использованные среды подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию перед утилизацией.