Гранулированная питательная среда HiMedia GM842-500G «Основа агара с розовым бенгальским» предназначена для селективного выделения и количественного определения дрожжей и плесневых грибов. Основа используется для анализа пищевых, экологических и клинических образцов, а готовая среда применяется с селективной добавкой FD033 для подавления роста бактерий.

Назначение

Основа агара с розовым бенгальским предназначена для селективного выделения и количественного определения дрожжей и плесневых грибов из:

• пищевых образцов;
• образцов окружающей среды;
• клинических образцов, включая соскобы кожи.

Продукт предназначен для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Агар с розовым бенгалом представляет собой селективную среду для выявления и количественного определения дрожжей и плесневых грибов в пищевых образцах.

Применение сред с кислым pH позволяет избирательно подавлять рост бактерий и стимулировать рост грибов. Среды с нейтральным pH и антибиотиками могут быть предпочтительнее подкисленных сред для культивирования грибов, поскольку подкисленные среды способны подавлять рост грибов, не полностью подавлять рост бактерий и ограничивать размер колоний плесневых грибов.

Основа агара с розовым бенгалом с добавлением хлорамфеникола представляет собой модификацию рецептуры агара с розовым бенгалом и хлортетрациклином. В качестве селективной добавки вместо хлортетрациклина используется хлорамфеникол. Хлорамфеникол выбран благодаря термостабильности и широкому антибактериальному спектру действия.

Функции компонентов среды:

• соевый пептон обеспечивает источники углерода и азота, необходимые для роста широкого спектра микроорганизмов;
• декстроза служит источником энергии;
• одноосновный фосфат калия обеспечивает буферную способность;
• сульфат магния обеспечивает необходимые микроэлементы;
• розовый бенгал действует как селективный компонент, подавляет рост бактерий и ограничивает размер и высоту колоний быстрорастущих плесневых грибов;
• розовый бенгал поглощается колониями дрожжей и плесневых грибов, облегчая их распознавание и количественный подсчёт;
• селективная добавка FD033 подавляет рост бактерий.

Некоторые штаммы грибов могут расти на полной среде слабо или не расти вследствие селективных свойств среды и типа исследуемого образца. Некоторые штаммы бактерий могут подавляться не полностью или только частично.

Среду нельзя подвергать воздействию света: фотодеградация розового бенгала приводит к образованию соединений, токсичных для грибов.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 31,55 г основы в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов, что соответствует ориентировочно ≈0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки FD033 на каждые 500 мл среды.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика работы с образцами

1. Внесите в чашки Петри по 1 мл подходящих разведений образца.
2. Добавьте охлаждённую среду.
3. Тщательно перемешайте содержимое чашек.
4. Инкубируйте до 5 суток при 25 °C.
5. Рассчитайте количество дрожжей или плесневых грибов на 1 г или 1 мл образца умножением числа колоний на коэффициент разведения.
6. Колонии дрожжей приобретают розовую окраску вследствие поглощения розового бенгала.
7. После завершения работы загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый гранулированный свободно сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность готовой среды

В чашках Петри образуется прозрачный или от слабой опалесценции до прозрачного гель насыщенного розового цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 3,16 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации в течение 5 суток при 20–25 °C с добавлением селективной добавки FD033.

Обозначения:
* соответствующие номера WDCM;

ранее известен как Aspergillus niger.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа питательной среды.
• Масса: 500 г.
• Температура хранения продукта: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.

В отличие от подкисленных сред, состав с нейтральным pH и селективной добавкой на основе хлорамфеникола сочетает подавление бактериального роста с поддержанием роста дрожжей и плесневых грибов.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать различный характер роста на среде.
2. Каждая партия среды проверяется на микроорганизмы, указанные в сертификате анализа. Для работы с микроорганизмами, не указанными в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом конкретных требований.
3. Среду нельзя подвергать воздействию света, поскольку фотодеградация розового бенгала приводит к образованию соединений, токсичных для грибов.

Хранение и срок годности

• Храните продукт при 10–30 °C в плотно закрытой упаковке.
• Приготовленную среду храните при 2–8 °C.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может