Агар Legionella-основа, Granulated HiMedia GM809A-500G (500 г)

Гранулированная микробиологическая среда Агар Legionella-основа, Granulated HiMedia GM809A-500G (500 г) предназначена для культивирования бактерий рода Legionella после добавления добавок. Среду используют для исследования проб воды; предполагаемые колонии оценивают сравнительным выращиванием на средах с L-цистеином и без него.

Назначение

Среда предназначена для культивирования видов Legionella после добавления соответствующих добавок. Тип образца: вода.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизована для соответствия рабочим характеристикам.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 12,5 г среды в 440 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите до 45–50 °C и асептически добавьте содержимое 1 флакона добавки для роста BCYE (FD142).
5. Если селективную добавку GVPC (FD143) или модифицированную селективную добавку GVPA (FD160) не используют, асептически добавьте 10 мл стерильной дистиллированной воды, доведя общий объём среды до 500 мл. Конечный pH среды составляет 6,9 ± 0,2.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри. Во время разлива перемешивайте среду, чтобы частицы угля не оседали.
7. Для приготовления селективной среды асептически добавьте регидратированное содержимое 1 флакона одной из добавок: BMPA (FD144), GVPC (FD143) или модифицированной GVPA (FD160), а также 1 флакон добавки для роста BCYE (FD142) к 440 мл стерильной расплавленной и охлаждённой основы агара для Legionella.
8. Одновременно можно приготовить среду без L-цистеина: асептически добавьте содержимое 1 флакона добавки для роста Legi без L-цистеина (FD206).

Принцип действия и интерпретация результатов

Агар для Legionella, первоначально называвшийся агаром F-G, был модифицирован заменой крахмала на уголь, а гидролизата казеина — на дрожжевой экстракт; эта модификация улучшила выделение Legionella pneumophila. Добавление буфера ACES (N-(2-ацетамидо)-2-аминоэтансульфоновая кислота) повышает питательную ценность среды и помогает поддерживать pH, необходимый для оптимального роста Legionella. Добавление α-кетоглутарата повышает чувствительность среды.

Дрожжевой экстракт обеспечивает необходимые азотсодержащие питательные вещества для роста Legionella. Активированный уголь нейтрализует токсичные соединения, которые накапливаются в среде во время роста или образуются при её стерилизации. Антибиотики в составе добавок подавляют рост различных загрязняющих бактерий и грибов.

Виды Legionella имеют абсолютную потребность в L-цистеине. Предполагаемые колонии Legionella можно пересевать на агар для Legionella с добавкой FD142 и на среду с добавкой FD206, не содержащую L-цистеин. Чашки инкубируют при 35 °C. Колонии, растущие на агаре с FD142 и L-цистеином, но не растущие на агаре с FD206 без L-цистеина, можно считать предположительно относящимися к роду Legionella.

Контроль качества

Внешний вид: гранулированная среда серого или чёрного цвета.

Желеобразование: плотное, сопоставимое с гелем 1,3%-ного агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется непрозрачный гель чёрного цвета.

Реакция: pH 2,5%-ного водного раствора после добавления добавки для роста BCYE (FD142) при 25 °C — 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной добавки для роста BCYE (FD142) или добавки для роста Legi без L-цистеина (FD206), а также селективной добавки GVPC (FD143) или модиф