Гранулированная питательная среда HiMedia GM616I-500G «Модифицированный агар на основе Tergitol 7» предназначена для селективного выделения и количественного определения колиформных бактерий в воде методом мембранной фильтрации и хранится при 10–30 °C. Среда применяется для анализа проб воды с последующей инкубацией при 37 °C для определения общих колиформ и при 44 °C для определения фекальных колиформ; для полной идентификации требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.

Назначение и область применения

Среда предназначена для селективного выделения и количественного определения колиформных микроорганизмов в пробах воды методом мембранной фильтрации. Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 9308-1:2000.

Тип исследуемого образца

• Образец: вода

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности. HM-экстракт эквивалентен мясному экстракту.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 57,15 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте 2,5 мл 1%-ного раствора трифенилтетразолий хлорида (TTC), реагент FD057.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Tergitol-7 Agar — селективная и дифференциальная среда для обнаружения и количественного определения колиформных бактерий в воде. Исходная формула Tergitol-7 Agar была модифицирована добавлением трифенилтетразолий хлорида (TTC); такая среда рекомендована комитетом ISO.

Tergitol 7 действует как селективный агент: подавляет рост грамположительных микроорганизмов и уменьшает роение видов Proteus, что способствует восстановлению колиформных бактерий. Ферментация лактозы определяется по изменению окраски бромтимолового синего — индикатора pH.

TTC обеспечивает более раннее распознавание и идентификацию Escherichia coli и Klebsiella aerogenes в воде и пищевых продуктах. Пептон, HM-экстракт и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота и других необходимых питательных веществ, включая витамины группы B. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH.

Колиформные бактерии, за исключением Escherichia coli и Klebsiella aerogenes, быстро восстанавливают TTC до нерастворимого формазана, окрашивающего колонии в красный цвет. Лактозоположительные микроорганизмы образуют зеленовато-жёлтые колонии с жёлтыми зонами, а лактозоотрицательные — красные колонии, окружённые синими зонами.

Проведение анализа методом мембранной фильтрации

1. Профильтруйте исследуемый образец через две мембраны.
2. Поместите одну мембрану на чашку с TTC Tergitol Agar.
3. Инкубируйте первую чашку при 37 °C в течение 24 ч для определения общих колиформных бактерий.
4. Поместите вторую мембрану на отдельную чашку с TTC Tergitol Agar.
5. Инкубируйте вторую чашку при 44 °C в течение 18–24 ч для определения фекальных колиформных бактерий.
6. После инкубации при 44 °C идентифицируйте жёлтые колонии с интенсивно жёлтым ореолом как фекальные колиформные бактерии.

Технические характеристики

• Тип продукта: гранулированный
• Физическая форма: гранулы
• Назначение: агар
• Масса: 500 г
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40

Контроль качества

Внешний вид

• Цвет и форма: гранулированная среда от кремового до светло-зелёного цвета.

Гелеобразование

• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,6%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Приготовленная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета, образующийся в чашках Петри.

Реакция

• Условия определения: реакция 5,71%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральную реакцию наблюдали после добавления 1%-ного раствора TTC, реагент FD057, и инкубации при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч. Коэффициент восстановления считают равным 100 % для роста бактерий на референсной среде — соево-казеиновом агаре (триптиказо-соевом агаре).

Специфичность

Культуральную реакцию наблюдали после добавления 1%-ного раствора TTC, реагент FD057, и инкубации при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.

Селективность

Культуральную реакцию наблюдали после добавления 1%-ного раствора TTC, реагент FD057, и инкубации при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее этот микроорганизм был известен как Enterobacter aerogenes.

^ Ранее этот микроорганизм был известен как Pseudomonas aeruginosa.

Селективность

Сбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными требованиями. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения комкования из-за гигроскопичности среды.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Для сохранения рабочих характеристик используйте продукт в течение указанного срока годности.

Меры предосторожности

Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории и стандартные меры предосторожности, установленные для обращения с образцами. Руководствуйтесь требованиями безопасности, приведёнными в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для полной идентификации микроорганизмов необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Утилизация