HiMedia GM493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом

Гранулированная питательная среда HiMedia GM493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом предназначена для выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков. Среда применяется для анализа проб воды, включая мембранно-фильтрационный метод, и имеет гранулированную форму в упаковке из HDPE.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков (энтерококков).

Тип образца: пробы воды.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 7899-2:2000 и ISO 11333:2014, включая поправку Amd.2:2020.

Состав среды

Спецификация ISO 7899-2:2000 — агар с желчью, эскулином и азидом

Гранулированный агар с желчью, эскулином и азидом Bile Esculin Azide Agar, Granulated® GM493I

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Желчь эквивалентна Oxgall.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 56,65 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Стрептококки группы D имеют в клеточной стенке антиген липотейхоевой кислоты группы D. Представители бывшей группы D, являющиеся преобладающими нормальными обитателями желудочно-кишечного тракта человека, называются фекальными стрептококками или энтерококками (1).

Уникальная способность энтерококков расщеплять эскулин была описана Meyer и Schonfeld (2). Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эсцулетина и декстрозы; эсцулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричнево-чёрного осадка (3). Использование гидролиза эскулина для идентификации энтерококков впервые было предложено Rochaix (4).

Агар с желчью и эскулином первоначально разработан Swan (5) для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Facklam и Moody (6, 7) дополнительно показали, что агар с желчью и эскулином позволяет дифференцировать стрептококки группы D и стрептококки, не относящиеся к группе D. Также было показано, что агар с желчью и эскулином помогает дифференцировать представителей родов Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter, Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae по признаку гидролиза эскулина (8). Для идентификации энтерококков необходимо выполнять дополнительные тесты, например тест на устойчивость к соли (9).

Агар с желчью, эскулином и азидом является модификацией агара с желчью и эскулином (5, 6) согласно Isenberg (10). В этой среде снижена концентрация желчи и дополнительно введён азид натрия. Агар с желчью, эскулином и азидом, рекомендованный комитетом ISO (11), представляет собой модификацию агара с желчью, эскулином и азидом M493 с изменённым типом используемых источников углерода.

Триптон, пептон и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и необходимых питательных веществ для роста. Желчь и азид натрия подавляют большинство сопутствующих микроорганизмов. Эскулин в составе среды гидролизуется до эсцулетина и декстрозы. Эсцулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, визуализируемого в виде зоны чёрного осадка вокруг колоний.

Если среду разливают в пробирки в виде скошенного агара, положительной реакцией считается почернение более половины скошенной части в течение 24–48 ч. Если почернение полностью отсутствует или в течение 24–48 ч почернело менее половины скошенной части, реакцию считают отрицательной.

Стрептококки группы viridans иногда дают слабоположительную реакцию. Виды Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, также дают положительный результат в тесте на гидролиз эскулина в присутствии желчи (12). Для усиления роста энтерококков агар с желчью и эскулином можно дополнить лошадиной сывороткой из расчёта 50 мл/л (3).

Методика анализа проб воды

1. Подозрительные пробы воды фильтруют через мембранные фильтры.
2. Мембранные фильтры асептически переносят на среду Сланеца—Бартли M612I.
3. После инкубации красные или бордовые колонии дополнительно подтверждают асептическим переносом мембранного фильтра на чашку с агаром с желчью, эскулином и азидом, предварительно нагретую до 44 °C.
4. После инокуляции инкубируют при 44 ± 0,5 °C в течение 2 ч.
5. Все типичные колонии, вокруг которых наблюдается коричнево-чёрное окрашивание среды, подсчитывают как кишечные энтерококки (11).

В качестве альтернативы агар с желчью, эскулином и азидом можно использовать для прямого выделения энтерококков без мембранного фильтра. В этом случае инкубируют посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам (13).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

Из-за различий в пищевых потребностях отдельные штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: GM493I-500G
• Назначение изделия: агар
• Тип продукта: гранулированный
• Физическая форма: гранулы
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: HDPE
• Масса: 500 г
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C

Контроль качества

Внешний вид

Цвет гранулированной среды: от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого.

Гелеобразование

Гель плотный, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется раствор янтарного цвета — прозрач