HiMedia GM493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом

Сухая питательная среда HiMedia GM493I-500G Агар с желчью, эскулином и азидом для изоляции и предварительной идентификации фекальных стрептококков. Состав и рабочие характеристики среды соответствуют спецификациям ISO 7899-2:2000 и ISO 11333:2014 (с поправкой Amd.2: 2020).

Принцип измерения

Среда основана на способности энтерококков и стрептококков группы D гидролизовать эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин взаимодействует с цитратом железа, образуя темно-коричневый или черный осадок вокруг колоний.

Триптон, пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают необходимые источники углерода, азота, аминокислот, витаминов и факторов роста. Желчь и азид натрия подавляют рост большинства сопутствующих бактерий.

Область применения

Среда предназначена для анализа проб воды. Используется двумя способами:

1. Метод мембранной фильтрации: образцы воды фильтруют через мембранные фильтры, которые затем асептически помещают на среду Slanetz and Bartely (M612I). Красные или бордовые колонии после инкубации переносят на чашки с агаром с желчью, эскулином и азидом, предварительно нагретые до 44 °C.
2. Прямой посев: изоляция энтерококков путем инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. {Suspend} Растворить 56,65 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,07 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Интерпретация результатов

• Положительная реакция: появление зоны темно-коричневого или черного осадка вокруг колоний.
• При использовании скоса (в пробирках): положительный результат фиксируется при почернении более половины скоса в течение 24–48 часов.
• Отрицательная реакция: полное отсутствие почернения или почернение менее половины скоса за 24–48 часов.

При использовании метода мембранной фильтрации с инкубацией при 44 $\pm$ 0,5 °C в течение 2 часов все типичные колонии с коричнево-черным окрашиванием окружающей среды подсчитываются как кишечные энтерококки.

Технические характеристики

Состав по спецификации ISO 7899-2:2000

Состав гранулированной среды GM493I

Общие параметры

• Вид: гранулированная среда
• Цвет готовой среды: янтарный, от прозрачного до слегка опалесцирующего с голубоватым оттенком
• pH (5,67% водный раствор при 25 °C): 7,2 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Желирование: плотный гель (сопоставимо с 1,5% агаром)
• Происхождение компонентов: животное
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Контроль качества и культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников воспламенения.

Ограничения и предостережения

• Из-за вариаций в питательном составе некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.
• Вируданс-стрептококки иногда дают слабую положительную реакцию.
• Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, также дают положительный тест на эскулин в присутствии желчи.
• Для усиления роста энтерококков в среду можно добавить 50 мл/л конской сыворотки.

Утилизация

Загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с лабораторными правилами обращения с инфекционными материалами.