Питательная микробиологическая среда Агар Мюллера-Хинтона HiMedia GM173-500G (500 г) производства HiMedia предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда используется для чистых культур, выделенных из клинических образцов, и выпускается в гранулированной форме с конечным pH 7,3 ± 0,1.

Назначение

Агар Мюллера-Хинтона рекомендуется для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, выделенным из клинических образцов: мочи, кала, крови и других материалов.

Среда предназначена для метода дисковой диффузии: антимикробные препараты, нанесённые на бумажные диски, диффундируют через агаровый гель, а диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Эквивалент инфузии говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Функции компонентов

Твёрдые вещества инфузии HM B и Acicase обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами.

Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.

Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; содержание оценивается по значениям МПК для Enterococcus faecalis при применении сульфаметоксазола/триметоприма (SXT).

Приготовление среды

1. Суспендируйте 38,0 г сухой гранулированной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Эффективность партии проверена и стандартизирована в соответствии с действующим документом CLSI, ранее обозначавшимся как NCCLS, M6 — протоколами оценки сухой среды агар Мюллера-Хинтона.

Принцип действия и интерпретация

Формула Мюллера-Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера-Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера-Хинтона используется как тестовая среда для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда рекомендуется для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI.

Среда выбрана CLSI по следующим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов определения чувствительности от партии к партии.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства нетребовательных патогенных бактерий.
4. Для среды накоплен значительный объём данных и практического опыта оценки характеристик.

Kirby и Bauer рекомендовали среду для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера-Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Агар Мюллера-Хинтона с добавлением 5 % крови овцы и агар Мюллера-Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae к антимикробным препаратам.

Процедура Kirby–Bauer

Метод Kirby–Bauer основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровую среду.

1. Для анализа используют диск с одной концентрацией антимикробного препарата.
2. Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма равномерно наносят тампоном на всю поверхность среды.
3. На поверхность среды помещают бумажные диски, содержащие определённые количества антимикробных препаратов.
4. Чашки инкубируют.
5. Измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска.
6. Чувствительность определяют сравнением полученных диаметров зон со стандартами CLSI.

Диаметры зон подавления роста коррелируют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК).

На результаты диско-диффузионного тестирования влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация посевного материала;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Агар Мюллера-Хинтона не подходит для определения чувствительности методом дисковой диффузии у медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. У медленно растущих микроорганизмов увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и получению неточных результатов.

Среда рекомендуется для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом NCCLS, ныне CLSI — Института клинических и лабораторных стандартов.

Тип образца

Тип образца: клинический материал — чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических образцов.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для определения чувствительности чистых культур.
2. Плотность посевного материала может влиять на размер зоны подавления роста: слишком высокая плотность приводит к уменьшению зон, а слишком низкая — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; для них может потребоваться добавление крови.
4. Требовательные анаэробы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводят с использованием антибиотических дисков, необходимо обеспечить правильное хранение дисков; нарушение условий хранения может повлиять на активность препаратов.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами действия препарата in vivo.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: гранулированная среда от кремового до жёлтого цвета.

Желирование

Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,7 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель, формирующийся в чашках Петри.

Реакция и pH

Реакция: для водного раствора с концентрацией 3,8 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики и контроль эффективности

Антибиотикочувствительные тесты проводят в соответствии с действующим ISO/TS 16782; результаты должны соответствовать установленным пределам приемки. Эффективность среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % лошадиной крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % лошадиной крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Различные диски тестировали со стандартными штаммами ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с последним протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны подавления роста для указанных дисков являются показателем содержания тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

$ Зоны подавления роста для указанных дисков являются показателем содержания двухвалентных катионов в среде.