HiMedia GM1632-500G Агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 8.0

Гранулированная питательная среда HiMedia GM1632-500G Агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 8.0 с конечным pH 8,0 предназначена для микробиологического анализа остаточных противомикробных компонентов. Применяется для исследования образцов мяса и органов методом диффузии в агаре и методом четырёх чашек EEC с использованием тест-культур Bacillus subtilis и Micrococcus luteus.

Назначение и область применения

Агар для тестирования противомикробных ингибиторов pH 8,0 рекомендуется для анализа остаточных количеств противомикробных компонентов в образцах мяса и органов с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 и Micrococcus luteus ATCC 9341.

В мясной промышленности для санитарной обработки мышечной ткани применяют промывание, хлор и органические кислоты. Разные концентрации противомикробных соединений характеризуются различной эффективностью. Среда используется для определения таких соединений, как пенициллин, стрептомицин и сульфонамиды, оптимальная активность которых зависит от pH:

• пенициллин G оптимально активен при pH 6,0;
• стрептомицин оптимально активен при pH 8,0;
• сульфонамиды оптимально активны при pH 7,2.

Для анализа различных антибиотиков применяют три варианта агара для тестирования противомикробных ингибиторов:

• M1631 — pH 6,0;
• M1601 — pH 7,2;
• M1632 — pH 8,0.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности. HM extract соответствует мясному экстракту.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию 26,07 г обезвоженной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте 1 мл суспензии спор Bacillus subtilis или Micrococcus luteus в концентрации 10* КОЕ/мл на каждый литр стерильной охлаждённой среды при температуре 50–56 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация результатов

Метод диффузии в агаре

Небольшие срезы образца мяса помещают на чашки с засеянной тестовой средой и инкубируют. При наличии в образце противомикробные компоненты диффундируют в питательную среду и подавляют рост тест-культур, формируя свободную от роста зону ингибирования.

Для анализа применяют все три варианта агара для тестирования противомикробных ингибиторов с различным значением pH: M1631 (pH 6,0), M1601 (pH 7,2) и M1632 (pH 8,0). Различия оптимальной активности антибиотиков при разных значениях pH учитывают при интерпретации результатов.

Метод четырёх чашек EEC

1. Расплавленную и охлаждённую среду для тестирования противомикробных ингибиторов засевают тестовыми организмами: суспензией спор Bacillus subtilis (1) и Micrococcus luteus.
2. Тщательно перемешивают засеянную среду.
3. Разливают среду в чашки Петри.
4. На одной половине засеянной чашки асептически размещают два небольших кусочка образца мяса или органа размером 2–8 мм на соответствующем расстоянии друг от друга.
5. На второй половине чашки размещают диски со стандартным антибиотиком, который подлежит анализу; диски используют как контроль.
6. В качестве стандарта применяют диск со стрептомицином 10 мкг.
7. Инкубируют чашки в течение 18–24 ч:
   • при 30 °C для Bacillus subtilis;
   • при 37 °C для Micrococcus luteus.
8. После инкубации измеряют зоны ингибирования.
9. Измеряют расстояние между краем среза ткани и границей роста тест-организма.

Зона ингибирования не менее 2 мм считается положительным результатом. Зона менее 2 мм считается сомнительной; в исходных данных производителя для этого критерия также приведено значение «12 мм». Стандартный диск должен формировать зону ингибирования не менее 6 мм.

Функции компонентов среды

• Триптон и экстракт HM служат источниками углерода, азота и факторов роста для тестовых организмов.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.
• Фосфатная соль обеспечивает буферную ёмкость среды.
• Агар формирует твёрдую гелевую основу для диффузионного анализа.

Контроль качества

• Внешний вид: гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,61 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 8,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики и зоны ингибирования оценивают после инкубации в течение 18–24 ч: при 30 °C для Bacillus subtilis и при 37 °C для Micrococcus luteus.

Технические характеристики

• Наименование: агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 8,0, гранулированный.
• Артикул: GM1632-500G.
• Производитель: HiMedia.
• Назначение изделия: агар.
• Физическая форма: гранулы.
• Тип продукта: гранулированный.
• Происхождение: животное.
• Упаковка: HDPE (полиэтилен высокой плотности).
• Масса: 500 г.
• Конечный pH: 8,0 при 25 °C.
• Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Температурный режим эксплуатации и хранения по данным каталога: 10–30 °C.

Условия хранения и срок годности

• Хранить сухую среду при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Техническое отличие вариантов среды

GM1632 с pH 8,0 является одним из трёх вариантов агара для тестирования противомикробных ингибиторов; варианты M1631 и M1601 имеют pH 6,0 и 7,2 соответственно, что позволяет учитывать различия оптимальной активности пенициллина,