HiMedia GM1631-500G Агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 6.0

Питательная среда HiMedia GM1631-500G Агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 6.0 — гранулированный агар с конечным значением pH 6,00. Среда предназначена для анализа остаточных противомикробных компонентов в образцах мяса и органов методом диффузии в агар и методом четырёх чашек EEC с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633.

Назначение и область применения

Antimicrobial Inhibitor Test Agar pH 6.0 рекомендуется для анализа остаточных противомикробных компонентов в образцах мяса и органов с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 в качестве тест-организма.

При санитарной обработке мясных продуктов, помимо промывания, применяют противомикробные соединения, включая хлор и органические кислоты. Среда используется для определения наличия остаточных противомикробных компонентов и оценки зон подавления роста тест-организма.

Состав

Состав рассчитан и стандартизирован для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип измерения и интерпретация результатов

Метод диффузии в агар

Реагенты или остаточные противомикробные компоненты, присутствующие в образце, диффундируют в питательную среду и подавляют рост тест-организма, формируя свободную от роста зону ингибирования.

Для анализа:

1. На засеянные тестовые агаровые чашки помещают небольшие срезы образца мяса.
2. Чашки инкубируют.
3. После инкубации измеряют зону ингибирования.
4. Измеряют расстояние между краем тканевого среза и границей роста тест-организма.

Испытание повторяют на трёх типах агара для тестирования противомикробных ингибиторов с различными значениями pH:

• GM1631/M1631 — pH 6,0;
• GM1601/M1601 — pH 7,2;
• GM1632/M1632 — pH 8,0.

Различные антибиотики имеют разные диапазоны pH оптимальной активности:

• пенициллин G проявляет оптимальную активность при pH 6,0;
• стрептомицин — при pH 8,0;
• сульфонамид — при pH 7,2.

Метод четырёх чашек EEC

Расплавленную и охлаждённую среду для тестирования противомикробных ингибиторов засевают суспензией спор Bacillus subtilis, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

1. В одну половину засеянной чашки асептически помещают два небольших фрагмента образца мяса или органа размером 2–8 мм на достаточном расстоянии друг от друга.
2. Во вторую половину чашки помещают диски с анализируемым стандартным антибиотиком в качестве контроля.
3. В качестве стандарта используют диск с 0,01 МЕ натриевой соли пенициллина G.
4. Чашки инкубируют при 30 °C в течение 18–24 ч для Bacillus subtilis.
5. После инкубации измеряют зоны ингибирования.
6. Зону ингибирования между краем тканевого среза и границей роста тест-организма оценивают по размеру.

Зона ингибирования не менее 2 мм рассматривается как положительный результат. Зона менее 2 мм (12 мм) считается сомнительной согласно приведённой методике. Стандартный диск должен формировать зону ингибирования не менее 6 мм.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 25 г гранулированной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте 1 мл суспензии спор Bacillus subtilis на 1 л стерильной охлаждённой среды при температуре 50–56 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия компонентов

• Триптон и мясной экстракт служат источниками углерода, азота и факторов роста, необходимых для развития микроорганизмов.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс питательной среды.
• Агар формирует гелевую основу среды.

Контроль качества

• Внешний вид: гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный гель светло-янтарного цвета с лёгкой опалесценцией или без неё, формирующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,5 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 6,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики и зоны ингибирования определяют для Bacillus subtilis после инкубации при 30 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар.
• Масса: 500 г.
• Конечный pH при 25 °C: 6,00.
• Температура хранения нерастворённой среды: ниже 30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.

Хранение и срок годности

Храните гранулированную среду в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Сравнительный контекст

Для анализа антибиотиков с различными диапазонами оптимальной активности применяют среды GM1631/M1631 с pH 6,0, GM1601/M1601 с pH 7,2 и GM1632/M1632 с pH 8,0; GM1631-500G ориентирована на условия оптимальной активности пенициллина G при pH 6,0.