HiMedia GM162-500G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена (среда L.J.)

Основа среды Лёвенштейна-Йенсена (среда L.J.) HiMedia GM162-500G в гранулированной форме для изоляции и культивирования видов Mycobacterium. Применяется в микробиологических лабораториях для выделения микобактерий из клинических образцов (мокроты); вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Лёвенштейна-Йенсена относится к группе яичных сред, которые содержат цельные яйца или яичный желток, картофельный крахмал, соли и глицерин; затвердевание происходит путём инсписсирования (сгущения при нагревании).

В составе используется малахитовый зеленый, который служит ингибитором роста контаминантов и pH-индикатором:

• Образование синей зоны указывает на снижение pH из-за роста грамположительных контаминантов (например, Streptococci).
• Жёлтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

При использовании селективной добавки Gruft (FD053), содержащей пенициллин и налидиксовую кислоту, подавляется рост большинства сопутствующих микроорганизмов, выживших после деконтаминации образца. РНК в составе добавки стимулирует рост и повышает эффективность изоляции Mycobacteria.

Состав

Состав на 600 мл среды:

Методика приготовления и проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 37,24 г основы в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. Примечание: глицерин не следует добавлять при культивировании бычьих бактерий или других глицерофобных организмов.
2. При необходимости нагрейте для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Параллельно подготовьте 1000 мл стерильной эмульсии цельного яйца, собранной асептически.
6. Асептически добавьте эмульсию яйца к основе среды и, при необходимости, добавьте селективную добавку Gruft (FD053). Аккуратно перемешайте до получения однородной смеси.
7. Разлейте среду в стерильные пробирки с винтовыми крышками.
8. Установите пробирки под наклоном (для создания скоса).
9. Проведите коагуляцию и инсписсирование среды в водяной бане или автоклаве при 85 °C в течение 45 минут.

Посев и инкубация

Рекомендуется проводить инокуляцию каждого образца в трех повторностях:

• Для идентификации сапрофитов: инкубация при комнатной температуре (25 °C).
• Для определения пигментации (фотохромогены и скотохромогены): инкубация при 35 °C с чередованием освещения и темноты в зависимости от типа организма.
• Рутинное культивирование: аэробная инкубация при 35 °C.

Технические характеристики

• Внешний вид: гранулированный свободнотекущий порошок от зеленовато-синего до синего цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: после инкубации и сгущения образуются опаковые гладкие скосы бледно-голубого или зеленоватого цвета.
• Температура хранения: 10–30 °C (сухая основа), 2–8 °C (готовая среда).

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в присутствии 5–10 % $\text{CO}_2$ при использовании основы с добавлением эмульсии яйца после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Ограничения применения

• Среда общего назначения и может не поддерживать рост некоторых требовательных (fastidious) организмов.
• Возможен рост некоторых грамположительных контаминантов (например, Streptococci) и грамотрицательных бацилл.
• Допустим рост некоторых сапрофитов.
• Протеолитические контаминанты могут вызвать локальное или полное переваривание среды.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• При работе с клиническими образцами использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица) и соблюдать стандартные микробиологические правила работы с биоматериалом.
• Использованные материалы и загрязненные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.