HiMedia GM162-500G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена (среда L.J.)

Основа питательной среды HiMedia GM162-500G Основа среды Лёвенштейна–Йенсена (среда L.J.) представляет собой гранулированную основу для приготовления среды, предназначенной для выделения и культивирования видов Mycobacterium. Применяется при микробиологическом исследовании клинических образцов, включая мокроту, с учётом ограничений для быстрорастущих, сапрофитных и других сопутствующих микроорганизмов.

Назначение

Основа среды Лёвенштейна–Йенсена рекомендована для выделения и культивирования видов Mycobacterium. Тип образца: клинический материал, мокрота.

Продукт предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Состав, г/600 мл:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Твёрдые среды для выделения и культивирования Mycobacteria подразделяются на яичные и агаровые. Яичные среды содержат цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин; отверждение среды выполняется методом уплотнения при нагревании — инсписсирования.

Среда Лёвенштейна–Йенсена относится к наиболее распространённым яичным средам. Первоначальная формула Лёвенштейна включала красный конго и малахитовый зелёный. Йенсен модифицировал среду Лёвенштейна: изменил содержание цитрата и фосфата, исключил красный конго и увеличил концентрацию малахитового зелёного. Груфт дополнительно модифицировал среду Лёвенштейна–Йенсена, добавив два антимикробных компонента для повышения селективности.

Среда поддерживает рост широкого спектра видов Mycobacteria и может использоваться для определения ниацина.

Пенициллин и налидиксовая кислота из селективной добавки Груфта FD053 совместно с малахитовым зелёным подавляют рост большинства контаминирующих микроорганизмов, сохраняющихся после деконтаминации образца, и способствуют раннему росту Mycobacteria. РНК из FD053 действует как стимулятор и способствует повышению частоты выделения Mycobacteria.

Глицерин не следует добавлять в среду при культивировании бычьих или других глицерофобных штаммов.

Малахитовый зелёный выполняет функции ингибитора и индикатора pH. Образование синей зоны указывает на снижение pH под действием грамположительных контаминантов, например Streptococci. Жёлтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами. Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 37,24 г порошка в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. Для бычьих бактерий и других глицерофобных организмов добавление глицерина нежелательно.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите основу до 45–50 °C.
5. Одновременно асептически приготовьте 1000 мл эмульсии цельного яйца.
6. Асептически добавьте к основе эмульсию яйца и селективную добавку Груфта FD053, если требуется селективная среда.
7. Осторожно перемешайте компоненты до получения однородной смеси.
8. Разлейте смесь в стерильные пробирки с завинчивающимися крышками.
9. Разместите пробирки в наклонном положении.
10. Коагулируйте и уплотните среду в водяной бане для инсписсирования или в автоклаве при 85 °C в течение 45 мин.

Инкубация и постановка посева

Для идентификации сапрофитов каждый образец рекомендуется инокулировать и инкубировать в трёх повторностях:

• при комнатной температуре 25 °C — для идентификации сапрофитов;
• при 35 °C с попеременной инкубацией на свету и в темноте — для определения наличия или отсутствия пигментации у фотоchromогенных и скотохромогенных видов в зависимости от типа организма.

Стандартное культивирование выполняют аэробно при 35 °C.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов следует применять соответствующие стандартные процедуры деконтаминации и выделения микобактерий.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

• Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
• На среде могут расти отдельные грамположительные контаминанты, например Streptococci, а также грамотрицательные бациллы.
• На среде могут расти отдельные сапрофиты.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.
• При культивировании бычьих или других глицерофобных штаммов глицерин добавлять не следует.

Контроль качества

Внешний вид

Гранулированный, свободно сыпучий порошок от зеленовато-синего до павлинье-синего цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Смесь стерильной базовой среды и эмульсии цельного яйца после инсписсирования коагулирует с образованием гладких непрозрачных скошенных поверхностей бледного голубовато-зелёного цвета.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в присутствии 5–10 % CO₂, с добавленной эмульсией цельного яйца, после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: GM162-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Тип продукта: гранулированный
• Физическая форма: гранулы
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Материал упаковки: ПЭВП (HDPE, полиэтилен высокой плотности)
• Масса: 500 г
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8