Агар для выделения клостридий дифференциальный усиленный HiMedia GM1603-500G (уп/500 гр)

Дифференциальный усиленный агар для выделения клостридий HiMedia GM1603-500G (уп/500 г) в гранулированной форме. Применяется для культивирования и количественного определения Clostridium spp. в пробах воды и клиническом материале (фекалии).

Область применения

Среда рекомендована для выделения и подсчета клостридий из проб воды и клинических образцов. В сочетании с мембранным фильтром используется для определения Clostridium thermosaccharolyticum в сахаре. При добавлении крови среда применяется для исследования кишечной флоры, определения и подсчета Lactobacillus и Bacteroides в кале человека и животных.

Принцип измерения

Питательная основа состоит из триптона, пептона, пептона HM B и дрожжевого экстракта, которые обеспечивают микроорганизмы азотом, необходимыми питательными веществами и факторами роста. Глюкоза служит источником углерода и энергии.

Индикаторная система для определения редукции сульфита образована бисульфитом натрия и цитратом аммония-железа, что приводит к формированию колоний черного цвета. Резазурин выступает в роли редокс-индикатора, позволяя определять наличие анаэробии в среде.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка

Образец измельчают в стампере и готовят серию десятикратных разведений в 0,1% пептонной воде |M028| или растворе Рингера (в концентрации 1/4).

Посев и инкубация

1. Переносят 0,1 мл или 1 мл соответствующего разведения в пробирки с расплавленным (45–50 °C) дифференциальным усиленным агаром.
2. Для каждой пробы готовят дубликат.
3. Одну из пробирок (дубликат) нагревают при температуре 80 ± 1 °C в течение 10 минут для уничтожения вегетативных клеток.
4. Обе пробирки (нагретую и ненагретую) инкубируют при температуре 35 ± 1 °C в течение 5 дней.

Интерпретация результатов

• Почернение среды в пробирках свидетельствует о редукции сульфита клостридиями.
• Почернение в ненагретых пробирках считается предварительным подтверждением наличия сульфитредуцирующих клостридий; такие колонии подлежат пересеву на дифференциальный агар для подтверждения.
• Почернение в нагретых пробирках подтверждает наличие Clostridium.

Альтернативные методы:

• Поверхностный посев, посев методом распределения или глубокий посев в агар.
• Использование среды в качестве покрытия мембранного фильтра при фильтрационном методе.
• Инкубация чашек и пробирок при 35 ± 2 °C в течение 24–48 часов в анаэробных условиях.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 42,50 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление 15 фунтов/≈1 атм) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Характеристики и контроль качества

Состав (г/л)

Конечное значение pH (при 25 °C): 7,1 ± 0,2.

Контроль качества

• Внешний вид: Гранулированная среда от кремового до желтого цвета.
• Гелеобразование: Плотный гель, сопоставимый с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность: Светло-розовый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Культуральная реакция

Инкубация в анаэробной атмосфере при 30–35 °C в течение 1 недели.

Хранение и ограничения

• Порошок: Хранить при температуре 10–30 °C в плотно закрытой упаковке. Из-за гигроскопичности продукта неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Готовая среда: Хранить при температуре 20–30 °C (или +2...8 °C согласно инструкции в описании).
• Ограничения: Для полной идентификации требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.

Дополнительная информация