HiMedia GM1601-500G Агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 7.2

Гранулированная питательная среда HiMedia GM1601-500G Агар для тестирования противомикробных ингибиторов, pH 7.2 предназначена для анализа остаточных противомикробных компонентов в мясных и органных образцах и имеет конечный pH 7,2. Среда применяется в микробиологических и санитарно-бактериологических лабораториях с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633, а оценка выполняется методом диффузии в агар и методом четырёх чашек EEC.

Назначение

Antimicrobial Inhibitor Test Agar pH 7.2, гранулированная форма, предназначена для анализа остаточных противомикробных компонентов в образцах мяса и органов с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 в качестве тест-организма.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Методика приготовления

1. Приготовьте суспензию из 25,34 г сухой среды — эквивалентная масса обезвоженной среды на 1 л — в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте 1 мл суспензии спор Bacillus subtilis на 1 л стерильной охлаждённой среды при температуре 45–50 °C.
6. Добавьте 50 мкг триметоприма на 1 л среды.
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Для санитарной обработки мясных продуктов, помимо промывки, применяют противомикробные соединения, включая хлор и органические кислоты. Для таких соединений описаны различные концентрации и степени эффективности.

Среда GM1601-500G рекомендуется для анализа остаточных противомикробных компонентов в мясных и органных образцах с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 в качестве тест-организма. Анализ проводят методом диффузии в агар и методом четырёх чашек EEC.

Метод диффузии в агар

1. Небольшие срезы мясного образца помещают на чашки с засеянной тестовой агаровой средой.
2. Чашки инкубируют.
3. Присутствующие в образце противомикробные компоненты диффундируют в среду и подавляют рост тест-организма.
4. Вокруг образца формируется свободная от роста зона ингибирования.
5. Тест повторяют на трёх вариантах среды для противомикробных ингибиторов с различными значениями pH:
   • GM1631/M1631 — pH 6,0;
   • GM1601/M1601 — pH 7,2;
   • GM1632/M1632 — pH 8,0.

Различные антибиотики имеют собственные диапазоны pH, оптимальные для проявления активности. Например, пенициллин G оптимально активен при pH 6,0, стрептомицин — при pH 8,0, а сульфонамиды — при pH 7,2.

Триметоприм в количестве 50 мкг добавляют для повышения чувствительности тестовой агара к остаточным сульфонамидам в образцах мяса и органов.

Метод четырёх чашек EEC

1. Расплавленную и охлаждённую среду для определения противомикробных ингибиторов засевают тест-организмом — суспензией спор Bacillus subtilis.
2. Тщательно перемешивают среду с посевным материалом.
3. Разливают засеянную среду в чашки Петри.
4. На одну половину засеянной чашки асептически помещают небольшой фрагмент мяса или органа размером 2–8 мм, выдерживая необходимое расстояние от других объектов.
5. На вторую половину чашки помещают диски со стандартным антибиотиком, который требуется анализировать; диски используют в качестве контроля.
6. В качестве стандартного диска применяют диск с 0,5 мкг сульфонамида.
7. Инкубируют чашки при 30 °C в течение 18–24 ч для Bacillus subtilis.
8. После инкубации измеряют зону ингибирования.
9. Измеряют расстояние между краем фрагмента ткани и границей роста тест-организма.

Зона ингибирования не менее 2 мм считается положительным результатом. Зона менее 2 мм считается сомнительным результатом; в исходных данных производителя для этого критерия также указано значение 12 мм. Стандартный диск должен формировать зону ингибирования не менее 6 мм.

Функции компонентов среды

• Пептон: источник углерода, азота и факторов роста для развития микроорганизмов.
• Хлорид натрия: поддержание осмотического баланса среды.
• Фосфатная соль: обеспечение буферной ёмкости среды.
• Триметоприм: повышение чувствительности тестовой среды к остаточным сульфонамидам.

Контроль качества

• Внешний вид: гранулированная среда от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный гель светло-янтарного цвета от прозрачного до слегка опалесцирующего.
• Реакция: реакция 2,53%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,20.

Культуральная реакция

Культуральную реакцию и зоны ингибирования оценивают для Bacillus subtilis после инкубации при 30 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар.
• Масса: 500 г.
• Конечный pH: 7,2 при 25 °C.
• Температура эксплуатации и хранения сухой среды: 10–30 °C.

Условия хранения и срок годности