Гранулированная питательная среда HiMedia GM1592-500G Основа бульона Болтона производства HiMedia предназначена для селективного обогащения видов Campylobacter. Применяется при анализе пищевых продуктов, кормов для животных и проб воды; масса упаковки составляет 500 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Основа бульона Болтона предназначена для селективного обогащения видов Campylobacter из пищевых продуктов и кормов для животных, а также термотолерантных видов Campylobacter из воды.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 10272-1:2017, ISO 17995:2019(E) и ISO 11133:2014(E)/Amd.:2020. Среда также сформулирована в соответствии с рекомендациями FDA BAM для обнаружения и количественного определения Campylobacter в пищевых продуктах, пробах окружающей среды на предприятиях пищевой промышленности и пробах воды.

Состав среды

ISO-спецификация — бульон Болтона

Содержание компонентов указано в г/л.

Основа бульона Болтона GM1592, гранулированная

Добавки после автоклавирования

Селективная добавка Болтона FD231, 2 флакона

Формула скорректирована и стандартизирована для достижения установленных показателей эффективности.

Эквивалентен ферментативному перевару тканей животных.

Методика приготовления

1. Внесите 13,80 г среды в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки Болтона FD231 и 25 мл стерильной гемолизированной дефибринированной крови лошади.
6. Кровь лошади может быть гемолизирована сапонином либо методом замораживания с последующим размораживанием.
7. Тщательно перемешайте среду и в асептических условиях разлейте в стерильные пробирки или колбы в необходимом объёме.

Принцип действия и интерпретация

Виды Campylobacter вызывают диарею от лёгкой до тяжёлой степени: жидкий водянистый стул часто сменяется кровавой диареей. Основными возбудителями инфекций являются C. jejuni, C. coli и C. lari. Основным источником заражения человека служат пищевые продукты животного происхождения. Непастеризованное молоко наиболее часто связывают со вспышками пищевого энтерита, вызванного Campylobacter jejuni.

Первоначально Campylobacter относили к роду Vibrio, однако эти микроорганизмы отличаются от Vibrio составом оснований ДНК и способностью расти при пониженном парциальном давлении кислорода. Селективные среды изначально разрабатывали для выделения C. jejuni из фекалий с использованием смеси антибиотиков в богатой базовой среде.

Селективность бульона Болтона обеспечивается добавлением цефоперазона, ванкомицина, триметоприма и амфотерицина B. Антибиотики вносят в виде лиофилизированных добавок. Пептон, гидролизат лактоальбумина и дрожжевой экстракт способствуют восстановлению сублетально повреждённых клеток Campylobacter.

Ванкомицин, цефоперазон и триметоприм подавляют рост грамположительных и грамотрицательных бактерий. Амфотерицин B преимущественно снижает рост дрожжей и плесневых грибов. Среда сформулирована по методу Болтона.

Типы исследуемых образцов

• Пищевые продукты.
• Корма для животных.
• Пробы воды.

Проведение анализа

Тестовая порция и первоначальная суспензия

Для приготовления первоначальной суспензии внесите 10 г или 10 мл исследуемой порции в 90 мл среды обогащения — бульона Болтона.

Инкубируйте первоначальную суспензию в микроаэрофильной атмосфере:

1. При 37 °C в течение 5 ± 1 ч.
2. Затем при 41,5 °C в течение 44 ± 4 ч.

Высев на плотную среду

Используя культуру, полученную в среде обогащения, выполните посев стерильной петлёй объёмом 10 мкл на поверхность агара mCCD (M887I).

Инкубируйте чашки при 41,5 °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

Подтверждение

Для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Контроль качества и характеристики

Внешний вид

Цвет гранулированной среды: от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий раствор коричневато-жёлтого цвета.
• После добавления гемолизированной крови лошади: непрозрачный раствор красного или коричневого цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 2,76 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,4 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Продуктивность

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Болтона FD231 и инкубации в микроаэрофильной атмосфере при 37 ± 1 °C в течение 5 ± 1 ч, затем при 41,5 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч. Последующий пересев выполняют на среду M887I при 41,5 °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

Селективность

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Болтона FD231 и инкубации в микроаэрофильной атмосфере при 37 ± 1 °C в течение 5 ± 1 ч, затем при 41,5 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч. Последующий пересев выполняют на среду M887I при 41,5 °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.