HiMedia GM1578-500G Основа бульона BLE (буферный бульон для обогащения листерий)

Основа питательной среды HiMedia GM1578-500G Основа бульона BLE (буферный бульон для обогащения листерий) — гранулированная среда для микробиологических исследований. Применяется для обогащения проб пищевых и молочных продуктов при выделении Listeria monocytogenes; масса упаковки — 500 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Продукт предназначен для селективного обогащения при выделении Listeria monocytogenes из пищевых и молочных образцов. Метод обогащения рекомендован Комитетом FDA для выделения Listeria monocytogenes.

Буферизованный бульон BLE представляет собой модифицированный бульон для обогащения листерий с повышенной буферной ёмкостью. Среда предназначена для применения совместно с ДНК-зондами и другими методами, более чувствительными по сравнению с традиционными культуральными методами.

Среда также рекомендована APHA для селективного обогащения L. monocytogenes.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных параметров эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, вызывающий листериоз у человека; однако в отдельных случаях с заболеваниями человека связывают также L. seeligeri, L. welshimeri и L. ivanovii. Микробиологические и эпидемиологические данные, полученные при спорадических и эпидемических случаях листериоза, показывают, что основным путём передачи инфекции является употребление пищевых продуктов, загрязнённых L. monocytogenes.

L. monocytogenes является хорошо изученным пищевым патогеном вследствие высокой заболеваемости при инфицировании животных и человека, а также психротрофных свойств, обеспечивающих высокую устойчивость к нагреванию, охлаждению и высушиванию. Микроорганизм выделяли на коммерческих молочных и других пищеперерабатывающих предприятиях. В природе L. monocytogenes широко распространён и обнаруживается в необработанных пищевых продуктах, почве, сточных водах, силосе и речной воде.

Виды Listeria растут в диапазоне pH 4,4–9,6 и сохраняются в пищевых продуктах с уровнем pH за пределами этого диапазона. Виды Listeria являются микроаэрофильными, грамположительными, неспорообразующими, неинкапсулированными, неветвящимися, правильными короткими подвижными палочками. Наиболее выраженная подвижность наблюдается при 20 °C.

Пищевые образцы часто загрязнены микроорганизмами, не относящимися к роду Listeria, что затрудняет выделение целевого микроорганизма. Для восстановления малых количеств L. monocytogenes из пищевых образцов требуется предварительное обогащение.

Триптон и соевый пептон обеспечивают среду аминокислотами и другими сложными азотсодержащими соединениями. Декстроза служит источником энергии. Пируват натрия способствует восстановлению повреждённых микроорганизмов. Фосфаты обеспечивают буферную ёмкость. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Дрожжевой экстракт является источником витаминов группы B.

Селективность среды обеспечивается включением антимикробных веществ:

• циклогексимид подавляет рост сапрофитных грибов;
• налидиксовая кислота подавляет рост грамотрицательных микроорганизмов;
• акрифлавин подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 24,03 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите приготовленную среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки ANC Selective Supplement FD063I.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные пробирки или колбы в необходимом объёме.

Образцы

Тип образца: пищевые и молочные продукты.

Сбор и обработка образцов

В соответствии с процедурой обогащения FDA для выделения L. monocytogenes из молочных продуктов:

1. Инокулируйте исследуемый образец в бульон для обогащения и инкубируйте при 30 °C в течение 4 ч без селективной добавки.
2. Через 4 ч добавьте селективную добавку.
3. Продолжите инкубацию ещё 44 ч при 30 °C.
4. Через 24 и 48 ч выполните высев обогащённой культуры штриховым методом на одну из следующих сред:
   • основу среды Oxford Listeria Medium M1145;
   • агар LPM M1228;
   • основу агара для идентификации листерий PALCAM M1064.
5. Инкубируйте посевы при 35 °C в течение 24–48 ч.
6. Отберите предположительно колонии Listeria.
7. Проведите дополнительную очистку колоний на агаре с триптон-соевым бульоном и дрожжевым экстрактом M1214.
8. Очищенные изоляты подвергните комплексу биохимических тестов для подтверждения присутствия L. monocytogenes.
9. После использования загрязнённые материалы перед утилизацией стерилизуйте автоклавированием.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий раствор с небольшим количеством осадка.

Реакция среды

Реакция: 4,8 % (м/о) водный раствор при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 30 °C в течение 24–48 ч с добавленной селективной добавкой ANC Selective Supplement FD0631.