HiMedia GM1544-500G Основа среды Кинга B

Гранулированная основа питательной среды HiMedia GM1544-500G Основа среды Кинга B предназначена для приготовления среды с конечным pH 7,2 ± 0,2. Основа применяется для неселективного выделения и культивирования видов Pseudomonas, а также для выявления продукции пигментов.

Назначение

Основа среды Кинга B рекомендована для неселективного выделения, культивирования и получения пигментов видов Pseudomonas.

Типы образцов:

• пищевые продукты;
• вода.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими параметрами среды.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 42,23 г обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 15 мл глицерина.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В асептических условиях разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Pseudomonas aeruginosa образует два типа пигментов — пиоцианин и флуоресцеин. Образование этих пигментов является характерным свойством микроорганизма и способствует выделению Pseudomonas из клинического материала.

King также описал дополнительный пигмент — пиорубин. Пиоцианин имеет зелёную окраску, флуоресцеин — флуоресцентную жёлтую, пиорубин — красновато-коричневую. Некоторые штаммы образуют все перечисленные пигменты, другие — один или два.

P. aeruginosa может быть идентифицирована на среде Хью–Лейфсона (M826). Основа среды Кинга B особенно подходит для выявления флуоресцеина.

Основа среды Кинга B разработана на основе состава, предложенного King и соавторами. Среда может использоваться как универсальная среда для неселективного выделения видов Pseudomonas и получения пигментов из пищевых продуктов, косметических образцов и других материалов.

Agrobacterium традиционно идентифицируют как грамотрицательные бактерии, которые не образуют флуоресцентный пигмент на среде Кинга B и вызывают опухоли или образование волосистых корней при инокуляции тестовых растений.

Пептон протеозный обеспечивает бактерии углеродистыми и азотистыми соединениями, необходимыми для роста. Глицерин служит источником энергии и усиливает образование пигментов. Сульфат магния также способствует пигментообразованию. Пигменты и их производные, образуемые видами Pseudomonas, участвуют в захвате железа как сидерофоры; поэтому их образование значительно усиливается в условиях дефицита железа.

Образование пигментов, особенно нефлуоресцентного синего пиоцианина, хорошо выявляется при культивировании на среде Кинга B, не содержащей добавленного железа. Дикалий фосфат повышает содержание фосфора в среде и тем самым усиливает образование флуоресцентного пигмента.

Для инокуляции используют свежие культуры микроорганизмов, выращенные на среде Кинга A. Культуру инкубируют в течение ночи при 37 °C, затем 6 суток при комнатной температуре. На среде Кинга B инкубацию проводят при 37 °C в течение 6 суток.

Сбор и обработка образцов

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам и местным нормативам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные соответствующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в индивидуальных паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Разные микроорганизмы имеют различающиеся требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковую картину роста на среде.
• Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в COA, рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.
• Результаты следует регистрировать через 18–24 ч. Более ранняя или поздняя оценка может привести к ошибочным результатам.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

• Внешний вид: однородный гранулированный порошок кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: реакция 4,22%-ного водного раствора, содержащего 1,5 % об./об. глицерина, при 25 °C.
• pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

• Обозначения в скобках соответствуют номерам WDCM.

^ Ранее микроорганизм назывался Pseudomonas aeruginosa.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде в плотно закрытом контейнере для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности.
• Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов среды путём автоклавирования и/или