HiMedia GM1482-500G Основа модифицированной полужидкой среды RV

Гранулированная основа модифицированной полужидкой среды RV HiMedia GM1482-500G предназначена для выделения подвижных видов Salmonella из клинических, пищевых и экологических образцов. Среда применяется методом миграции бактерий в селективном геле при температуре 42 °C до 24 ч и не подходит для выявления неподвижных штаммов Salmonella.

Назначение и область применения

Основа модифицированной полужидкой среды RV используется для выделения подвижных видов Salmonella из клинических, пищевых и экологических образцов. Метод основан на способности подвижных бактерий мигрировать в селективной среде с образованием непрозрачных ореолов роста вокруг места посева.

Среда может применяться в сочетании с прямым культивированием. Для обогащения допускается использовать селенитовый бульон F Selenite F Broth (GM052/M052), для выделения видов Salmonella — агар XLD (GM031/M031). Пересев на агар XLD (GM031/M031) или агар маннитол-лизин (M1071) повышает выход выделения культур.

Среда не предназначена для выявления неподвижных штаммов Salmonella.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими параметрами.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 32,95 г основы в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 115 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки IMRV/RV Selective Supplement (FD193).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри или пробирки для приготовления столбиков среды в соответствии с назначением.

Требования к подсушиванию и инкубации

Подвижность Salmonella может резко снижаться, если поверхность агара становится слишком сухой. Перед использованием чашки должны быть хорошо подсушены. При появлении видимой влаги на крышке чашек или поверхности агара влагу необходимо удалить.

При инкубации чашки выдерживают в аэробных условиях в вертикальном положении не более 24 ч при соответствующей температуре.

Принцип действия и интерпретация

Виды Salmonella выделяются у человека и практически всех животных; они вызывают различные инфекции — от лёгкого самоограничивающегося гастроэнтерита до угрожающей жизни брюшнотифозной лихорадки.

Выделение Salmonella часто является трудоёмким и сложным процессом. Более 90 % видов Salmonella подвижны, поэтому ряд методик выделения основан на оценке подвижности. Модифицированная полужидкая среда RV позволяет выделять подвижные виды Salmonella из клинических, пищевых и экологических образцов.

Функции компонентов среды:

• специальный пептон обеспечивает азотистые и углеродистые соединения, а также другие необходимые для роста питательные вещества;
• дрожжевой экстракт служит источником витаминов группы B;
• фосфат обеспечивает буферную ёмкость среды;
• зелёный малохит используется как селективный агент;
• добавление новобиоцина в составе добавки FD193 избирательно подавляет большинство грамположительных микроорганизмов;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды;
• Salmonella обычно сохраняет жизнеспособность при несколько повышенном осмотическом давлении, обусловленном присутствием MgCl₂, растёт при несколько пониженном pH и обладает большей устойчивостью к зелёному малохиту по сравнению с другими бактериями.

Совокупность этих факторов обеспечивает селективность среды при выделении Salmonella. Среда обогащает Salmonella, а полужидкая консистенция позволяет дифференцировать подвижные и неподвижные бактерии.

Механизм действия основан на миграции видов Salmonella в селективной среде при конкуренции с другими подвижными микроорганизмами. Вокруг места инокуляции подвижные бактерии формируют непрозрачный ореол или зону роста. В чашках Петри ореол распространяется от места посева; в столбиках среды наблюдается непрозрачный рост, расходящийся от линии прокола.

Методика выявления подвижных видов Salmonella

1. Внесите по 3 капли, или 0,1 мл, предварительно обогащённой культуры возрастом 16–20 ч в отдельные точки на подсушенную на воздухе поверхность среды.
2. Инкубируйте чашки в вертикальном положении при 42 °C до 24 ч.
3. Оцените наличие ореола или зоны роста, исходящих от места инокуляции.
4. Колонии видов Salmonella имеют соломенную окраску.
5. Для подтверждения чистоты культуры и последующих биохимических и серологических исследований выполните пересев с внешнего края ореола.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет гранулированной среды: от светло-жёлтого до светло-синего.

Желирование

Среда полужидкая; характеристики сопоставимы с гелем, содержащим 0,26 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри или в пробирках в виде столбиков формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель синего цвета.

Реакция среды

Реакция 3,29 % масс./об. водного раствора при 25 °C: pH 5,5 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 5,30–5,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации с добавленной селективной добавкой IMRV/RV Selective Supplement (FD193) при указанных температурах в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Тип продукта: гранулированный.
• Физическая форма: гранулы.
• Назначение изделия: основа питательной среды.
• Происхождение: животное.
• Масса: 500 г.
• Упаковка: HDPE (полиэтилен высокой плотности).
• Температура хранения: ниже 30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Конечный pH при 25 °C: 5,5 ± 0,2.
• Диапазон pH: 5,30–5,70.
• Концентрация при контроле реакции: 3,29 % масс./об.
• Консистенция: полужидкая, сопоставимая с 0,26 % агаровым гелем.
• Температура стерилизации: 115 °C.
• Время стерилизации: 15 мин.
• Температура внесения селективной добавки: 45–50 °C.
• Селективная добавка: IMRV/RV Selective Supplement (FD193), восстановленное содержимое 1 флакона на приготовленный объём среды.
• Рабочая температура выявления подвижных видов Salmonella: 42 °C.
• Максимальное время инкубации при выявлении: до 24 ч.

Условия хранения

Хранить основу при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду хранить при 2–8 °C. Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.