HiMedia GM144-500G Основа колумбийского кровяного агара

Гранулированная основа питательной среды HiMedia GM144-500G Основа колумбийского кровяного агара с дозировкой 44,0 г/л. Предназначена для приготовления кровяного и шоколадного агара, селективных и идентификационных сред; без дополнительного обогащения кровью среда не поддерживает рост Haemophilus influenzae.

Назначение

Основа колумбийского кровяного агара HiMedia GM144-500G применяется для приготовления:

• кровяного агара;
• шоколадного агара;
• различных селективных сред;
• идентификационных питательных сред.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 44,0 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к охлаждённой стерильной основе.

Приготовление шоколадного агара

1. Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к охлаждённой стерильной основе.
2. Нагревайте при 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Селективность среды обеспечивается добавлением различных противомикробных препаратов к стерильной основе.

• Для видов рода Brucella: добавьте регидратированное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.
• Для видов рода Campylobacter: добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы регидратированное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок: Blaser-Wang (FD006), Butzler (FD007), Skirrow (FD008), VTCA (FD090) или Butzler VI (FD106). Дополнительно внесите регидратированное содержимое 1 флакона минеральной ростовой добавки (FD009) и 5–7 % об./об. крови лошади или овцы.
• Для видов рода Gardnerella: добавьте регидратированное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.
• Для кокков: добавьте регидратированное содержимое 1 флакона одной из селективных добавок — NC (FD030), NNP (FD031) или CO (FD119) — к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Принцип действия и интерпретация

Основа колумбийского кровяного агара разработана Ellner и соавторами. Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда способствует формированию типичной морфологии колоний, усиленному образованию пигмента и более чётко выраженным гемолитическим реакциям.

По данным Fildes, питательный агар с добавлением гидролизата крови овцы обеспечивает оба этих фактора и поддерживает рост H. influenzae. Добавление бацитрацина делает обогащённую колумбийскую агаровую среду селективной для выделения видов рода Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Основа колумбийского агара используется в качестве основы для сред с добавлением крови, а также для селективных составов, в которых применяются различные комбинации противомикробных добавок.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Кровь овцы позволяет выявлять гемолиз и обеспечивает гем — X-фактор, необходимый для роста многих бактерий. При этом кровь овцы не содержит V-фактор — никотинамид-адениндинуклеотид; поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно X- и V-факторы, на этой среде не растёт.

Колумбийская агаровая основа с добавлением стерильной сыворотки образует эффективную среду для определения вирулентности Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся отчётливо видимыми через 48 ч.

Многие патогенные микроорганизмы требуют углекислого газа, поэтому чашки можно инкубировать в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Тип образцов

Клинические образцы:

• гной;
• мазки из носа.

Отбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методики обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия инкубации

• Культуры рода Brucella: отличаются высокой инфекционностью и требуют осторожного обращения; инкубируйте в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂.
• Виды рода Campylobacter: оптимально выращивать при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки со средой с добавками для Gardnerella: инкубируйте при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере, содержащей 7 % CO₂.

Ограничения применения

1. Некоторые требовательные микроорганизмы, например Haemophilus influenzae, могут не расти на среде; может потребоваться добавление крови.
2. Из-за относительно высокого содержания углеводов бета-гемолитические стрептококки могут демонстрировать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за альфа-гемолиз.
3. Для всех выделенных колоний выполняйте подтверждающие тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Однородная гранулированная среда от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 5 % м/об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,4 % м/об. при 25 °C.

• pH: 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли после добавления 5 % м/об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Инструкции по безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Храните продукт в плотно закрытом контейнере в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности.
• Н