Основа Колумбийского кровяного агара HiMedia GM144-500 (гранулированная форма) (уп/500 г)

Гранулированная питательная среда Основа Колумбийского кровяного агара HiMedia GM144-500 (гранулированная форма) (уп/500 г) — основа для приготовления кровяного, шоколадного, селективного и идентификационного агаров. Применяется для культивирования требовательных и нетребовательных микроорганизмов, при этом перед добавлением термочувствительных компонентов стерильную основу охлаждают до 45–50 °C.

Назначение

Основа предназначена для приготовления кровяного агара, шоколадного агара, а также различных селективных и идентификационных питательных сред.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Взвесьте 44,0 г сухой гранулированной среды и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную расплавленную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе. Нагревайте смесь до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Селективность среды обеспечивается добавлением различных противомикробных компонентов к стерильной основе.

Для культивирования видов Brucella добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для культивирования видов Campylobacter добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок:

• Blaser–Wang (FD006);
• Butzler (FD007);
• Skirrow (FD008);
• VTCA (FD090);
• Butzler VI (FD106).

Одновременно добавьте восстановленное содержимое 1 флакона ростовой минеральной добавки (FD009) и 5–7 % об./об. крови лошади или овцы.

Для культивирования видов Gardnerella добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для кокков добавьте восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок к 500 мл стерильной расплавленной основы:

• NC (FD030);
• NNP (FD031);
• CO (FD119).

Принцип действия и интерпретация

Колумбийская кровяная агаровая основа разработана Ellner и соавторами. Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда способствует формированию типичной морфологии колоний, усиленному образованию пигмента и более чётко выраженным гемолитическим реакциям.

Fildes установил, что питательный агар с добавлением переваренной крови овцы обеспечивает оба фактора и поддерживает рост H. influenzae. Добавление бацитрацина делает обогащённую колумбийскую агаровую среду селективной для выделения видов Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Колумбийская агаровая основа используется для приготовления сред с добавлением крови и селективных сред, в которых в качестве добавок применяются различные комбинации противомикробных компонентов.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Кровь овцы обеспечивает выявление гемолиза и поставляет гем — фактор X, необходимый для роста многих бактерий. При этом кровь овцы не содержит фактор V — никотинамидадениндинуклеотид; поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно факторы X и V, на этой среде не растёт.

Колумбийская агаровая основа с добавлением стерильной сыворотки образует эффективную среду для тестирования вирулентности Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся чётко видимыми через 48 ч.

Многие патогены требуют углекислого газа, поэтому чашки могут инкубироваться в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Культуры Brucella высокоинфекционны и требуют осторожного обращения; инкубацию проводят в атмосфере с содержанием 5–10 % CO₂.

Виды Campylobacter лучше всего растут при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.

Чашки со средой, содержащей добавки для Gardnerella, следует инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с содержанием 7 % CO₂.

Тип образцов

• Клинические образцы:
  • гной;
  • назальные мазки.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методики обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для in vitro диагностики.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Некоторые требовательные микроорганизмы, например Haemophilus influenzae, могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
2. Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
3. Для всех колоний необходимо выполнять подтверждающие тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Однородная гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 5 % мас./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4,4%-ного мас./об. водного раствора при 25 °C.

• pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % мас./об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.