Основа Оксфордской среды для листерий HiMedia GM1145-500G (500 г)

Гранулированная основа Оксфордской среды для листерий HiMedia GM1145-500G (500 г) производства HiMedia с содержанием агара 10,000 г/л. Основа предназначена для селективного выделения видов Listeria из патологических, пищевых, молочных и экологических образцов; для окончательной идентификации выделенных организмов требуются дополнительные биохимические исследования.

Назначение

Основа Оксфордской среды для листерий HiMedia GM1145-500G применяется для селективного выделения видов Listeria из патологического материала, клинических образцов, пищевых и молочных продуктов.

Тип образца:

• Клинические образцы: ткани и биологические жидкости.
• Пищевые и молочные образцы.

Продукт предназначен для применения in vitro и только квалифицированным персоналом.

Основа соответствует обозначению ФСЗ 2009/03709 и применяется в соответствии с ГОСТ Р 51921-2002.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных параметров эффективности.

Приготовление среды

1. Размешать 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,103 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладить среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавить восстановленное содержимое одного флакона Оксфордской селективной добавки для листерий FD071 или одного флакона селективной добавки CM FD126.
6. Тщательно перемешать.
7. Разлить среду в стерильные чашки Петри.

Принцип и интерпретация результатов

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий значение как возбудитель инфекций у человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связаны с заболеваниями животных. Все виды патогенны для овец и крупного рогатого скота.

Положительный диагноз листериоза может быть получен только после выделения и культивирования возбудителя из крови или образцов цереброспинальной жидкости поражённых организмов.

Основа Оксфордской среды для листерий разработана на основе рецептуры Curtis и соавторов для выделения L. monocytogenes из клинического материала и пищевых образцов. Специальный пептон служит источником необходимых питательных веществ. Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты.

Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных микроорганизмов, однако некоторые штаммы Staphylococci могут расти в виде эскулинотрицательных колоний. Циклогексимид используют для снижения грибкового загрязнения; цефотетан и фосфомицин подавляют чрезмерный рост бактерий. Акрифлавин, сульфат колистина и хлорид лития подавляют бактерии, отличные от видов Listeria. В качестве альтернативы может добавляться моксалактам (FD126), подавляющий как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизирует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с трёхвалентными ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве, однако при высокой загрязнённости образца рекомендуется предварительно разбавить инокулят. Методика выделения зависит от исследуемого материала. Для всех образцов рекомендуется селективное холодовое обогащение.

Методика работы с образцами

Фекальные и биологические образцы

1. Гомогенизировать образец в 0,1%-ной пептонной воде M028.
2. Непосредственно внести 0,1 мл гомогенизированного образца на селективную среду для Listeria либо в бульон для селективного обогащения.
3. Инкубировать при 30 °C в течение 7 суток.
4. После инкубации выполнить посев на селективную среду для Listeria.

Пищевые и экологические образцы

Для пищевых и экологических образцов обычно используют селективное обогащение.

Молоко и молочные продукты

1. Добавить 25 мл или 25 г образца к 225 мл бульона для обогащения Listeria UVM M890A.
2. Осторожно перемешать и гомогенизировать.
3. Инкубировать в течение 48 ч при 30 °C.
4. Выполнить посев обогащённой культуры штрихом на Оксфордскую среду для Listeria.
5. Инкубировать аэробно в течение 48 ч при 37 °C.
6. Отобрать 5 типичных колоний с положительной реакцией на эскулин.
7. Инокулировать отобранные колонии на соево-казеиновый агар M290.
8. Инкубировать в течение 24 ч.
9. Использовать полученные колонии для биохимического подтверждения.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления Оксфордской селективной добавки FD071 или селективной добавки CM FD126 и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.
** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Контроль качества

• Внешний вид порошка: гранулированная среда от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.
• Консистенция готовой среды: плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность готовой среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубоватым оттенком.
• Реакция: водный раствор концентрацией 5,55 % масс./об. при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2.
• pH готовой среды: 6,80–7,20.
• Культуральные свойства: оцениваются для указанных референс-штаммов после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч с добавлением Оксфордской селективной добавки FD071 или селективной добавки CM FD126.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа питательной