Основа Оксфордской среды для листерий HiMedia GM1145-500G (500 г)

Основа Оксфордской среды для листерий HiMedia GM1145-500G (500 г) производства HiMedia представляет собой гранулированную питательную среду для селективного выделения видов Listeria из патологического материала. Применяется для анализа клинических образцов (ткани, жидкости организма), а также проб пищевой и молочной продукции; позволяет дифференцировать L. monocytogenes по способности гидролизовать эскулин.

Принцип измерения

Среда основана на рецептуре Кертиса и др. Специальный пептон служит источником необходимых питательных веществ, а кукурузный крахмал нейтрализует токсичные метаболиты. Хлорид лития и антибиотики подавляют рост грамотрицательных и большинства грамположительных микроорганизмов (хотя некоторые штаммы Staphylococci могут расти, образуя эскулин-отрицательные колонии).

Для усиления селективности используются следующие компоненты:

• Циклогексимид: подавление грибковой контаминации.
• Цефотетан и фосфомицин: ингибирование чрезмерного развития микрофлоры.
• Акрифлавин, колистина сульфат и хлорид лития: ингибирование бактерий, кроме видов Listeria.
• Моксалактам (при использовании добавки FD126): ингибирует как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

Listeria monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин взаимодействует с трехвалентными ионами железа, что проявляется в виде зон почернения вокруг колоний.

Методика проведения анализа

Подготовка образцов

Для всех типов образцов рекомендуется селективное холодное обогащение.

1. Фекальные и биологические образцы: гомогенизируются в 0,1 % пептонной воде (M028). Около 0,1 мл пробы инокулируют непосредственно на селективную среду или в бульон для селективного обогащения. Инкубируют при 30 °C в течение 7 дней, после чего переносят на селективную среду.
2. Пищевые и экологические образцы: используют селективное обогащение. Для молока и молочных продуктов 25 мл (или 25 г) образца добавляют к 225 мл бульона для обогащения листерий UVM (M890A). После гомогенизации инкубируют 48 часов при 30 °C.

Посев и идентификация

1. Обогащенные культуры высевают штрихом на Оксфордскую питательную среду.
2. Инкубируют аэробно в течение 48 часов при 37 °C.
3. Отбирают 5 типичных колоний (положительных по эскулину) и инокулируют их на триптон-соевый агар с казеиновым переваром (M290).
4. Инкубируют 24 часа, после чего используют колонии для биохимической идентификации.

Приготовление среды

1. Растворить 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx 0,1$ МПа (15 psi) в течение 15 минут.
4. Остудить до 45–50 °C.
5. Асептически добавить содержимое 1 флакона Оксфордской добавки для листерий (FD071) или 1 флакона моксалактамовой добавки для листерий (FD126).
6. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Меры предосторожности: хлорид лития ядовит. Избегать вдыхания паров и контакта с кожей. При попадании на кожу немедленно промыть большим количеством воды.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид порошка: гранулы от светло-желтого до темно-желтого цвета.
• Консистенция: плотность соответствует 1,0 % агаровому гелю.
• Цвет и прозрачность: темно-янтарный прозрачный гель с легкой опалесценцией и голубоватым оттенком.
• Реакция (pH 5,55 % р-ра при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2.
• pH готовой среды: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики определены при добавлении Оксфордской добавки (FD071) или моксалактамовой добавки (FD126) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Ограничения и требования

• Различные микроорганизмы могут иметь индивидуальные требования к росту и демонстрировать вариативность паттернов на данной среде.
• Для окончательной идентификации изолированных организмов требуются дополнительные биохимические тесты.
• Среда предназначена для профессионального использования в лабораторных условиях (In Vitro диагностика).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре +10…+30 °C в плотно закрытом контейнере в сухом вентилируемом месте. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать флакон для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные материалы подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию.