HiMedia GM1106-500G M-Endo агар LES

Сухая питательная среда HiMedia GM1106-500G M-Endo агар LES для количественного определения колиформных бактерий в воде. Рекомендуется для использования в двухэтапном методе мембранной фильтрации; вес упаковки 500 г.

Область применения

Среда предназначена для подсчета общего числа колиформ в пробах воды. Рекомендуется Американской ассоциацией государственных санитарных инженеров и потребителей здравоохранения (APHA) для анализа питьевой и бутилированной воды.

Принцип измерения

Метод основан на способности колиформных бактерий ферментировать лактозу. В результате ферментации образуется ацетальдегид, который взаимодействует с сульфитом натрия и основным фуксином, что приводит к формированию красных колоний и окрашиванию самой среды. Бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии.

Для подавления роста грамположительных микроорганизмов в составе среды используются сульфит натрия, дезоксихолат натрия и основной фуксин. Фосфаты выполняют роль буферной системы.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. {51,05} г порошка суспендировать в 980 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов. Стерилизовать в автоклаве запрещено.
3. Охладить до 45–50 °C и асептически добавить 20 мл 95 % этанола.
4. Перемешать и разлить по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. При использовании больших чашек обеспечить глубину слоя среды 1,5 мм.
5. Хранить готовые чашки в защищенном от прямых солнечных лучей месте.

Процедура анализа (двухэтапный метод)

Этап 1: Обогащение

• Ватный абсорбирующий тампон пропитывают бульоном с лауриловым сульфатом (Lauryl Sulphate Broth, M080).
• Мембранный фильтр, через который пропущена проба воды, асептически помещают на тампон и инкубируют без переворачивания в течение 2 часов при 35 °C во влажной атмосфере.
• Альтернатива: мембранный фильтр помещают под крышку чашки Петри с M-Endo агаром LES, пропитывают 2 мл бульона с лауриловым сульфатом (M080) и инкубируют от 1 до 12 часов при 35 °C.

Этап 2: Посев на агар

• Подготовленный мембранный фильтр переносят непосредственно на поверхность M-Endo агара LES.
• Инкубируют при 35 °C в течение 24 часов.

Интерпретация результатов

Предположительные колиформы образуют золотисто-зеленые или красные колонии с металлическим блеском.

Расчет плотности колиформ: Подсчет проводится по фильтрам, содержащим от 20 до 80 колиформных колоний (но не более 200 колоний всех типов на мембране). Формула расчета: $\text{Общее число колиформ/100 мл} = \frac{\text{количество колиформных колоний}}{\text{объем отфильтрованной пробы (мл)}} \times 100$

Технические характеристики

Состав, г/л:

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 часов.

Контроль качества

• Внешний вид: гранулированная среда от светло-розового до пурпурного цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: в чашках Петри образуется красный, слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,2 ± 0,2 (для 5,1 % водного раствора с 2 % содержанием спирта при 25 °C).
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Ограничения и предостережения

• Из-за различий в трофических потребностях некоторые штаммы могут расти плохо.
• При слишком высокой плотности посева (избыточном инокуляте) металлический блеск колоний может быть подавлен.
• Избегайте воздействия прямых солнечных лучей на готовые чашки.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом проветриваемом помещении. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Утилизация: использованные среды и загрязненные материалы подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию.