HiMedia GM1106-500G M-Endo агар LES

Питательная агаризованная среда HiMedia GM1106-500G M-Endo агар LES предназначена для подсчёта колиформных бактерий в воде двухэтапным методом мембранной фильтрации. Среда используется для анализа проб воды, при этом после приготовления её нельзя автоклавировать и следует защищать от прямого солнечного света.

Назначение

Среда M-Endo агар LES рекомендована для количественного определения колиформных бактерий в воде с применением двухэтапной методики мембранной фильтрации.

Тип образца: пробы воды.

Состав

Состав приведён для 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Бактерии удаляются из жидкостей пропусканием пробы через мембранные фильтры с настолько малым размером пор, что микроорганизмы задерживаются на поверхности фильтра. Мембранная фильтрация позволяет быстро пропускать под давлением сравнительно большие объёмы воды, предотвращая прохождение содержащихся в пробе бактерий.

Питательные вещества удерживаются на поверхности мембраны. После контакта мембраны с подходящей жидкой питательной средой компоненты диффундируют вверх через поры, обеспечивая рост микроорганизмов в виде поверхностных колоний, которые затем можно подсчитать.

Среда Endo изначально разработана для дифференциации бактерий, ферментирующих лактозу, и неферментирующих лактозу. В составе среды используются сульфит натрия и основной фуксин вместо желчных солей для подавления грамположительных бактерий.

M-Endo агар LES представляет собой модификацию исходной среды Endo. Состав разработан по формуле McCarthy и соавторов из Lawrence Experimental Station (LES) для определения колиформных бактерий в воде двухэтапным методом мембранной фильтрации. На первом этапе обогащения используется бульон лаурилсульфата (M080).

Триптон, триптоза, пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают колиформные бактерии необходимыми питательными веществами, особенно азотистыми соединениями. Лактоза является ферментируемым углеводом. Сульфит натрия, дезоксихолат натрия и основной фуксин подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты выполняют буферную функцию.

Колиформные бактерии ферментируют лактозу. Образующийся ацетальдегид реагирует с сульфитом натрия и основным фуксином с формированием красных колоний и аналогичного окрашивания среды. Неферментирующие лактозу бактерии образуют бесцветные колонии.

Предположительно колиформные бактерии образуют золотисто-зелёные колонии с металлическим блеском в течение 24 ч инкубации.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 51,05 г сухой среды в 980 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите раствор до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 20 мл 95%-ного этанола.
6. Перемешайте среду.
7. Разлейте по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм.
8. При использовании больших чашек внесите достаточное количество среды для формирования слоя толщиной 1,5 мм.
9. Не подвергайте чашки воздействию прямого солнечного света.

Двухэтапная мембранная фильтрация

1. На первом этапе обогащения пропитайте ватный абсорбирующий диск бульоном лаурилсульфата (M080).
2. Пропустите пробу воды через мембранный фильтр.
3. В асептических условиях поместите мембранный фильтр на пропитанный диск.
4. Инкубируйте фильтр без переворачивания в течение 2 ч при 35 °C во влажной атмосфере.
5. После инкубации в асептических условиях перенесите мембранный фильтр на чашку с агаром M-Endo LES.
6. Инкубируйте при 35 °C в течение 24 ч.
7. В качестве альтернативного варианта поместите диск с мембранным фильтром во внутреннюю часть крышки чашки Петри с агаром M-Endo LES.
8. Пропитайте диск 2 мл бульона лаурилсульфата (M080).
9. Инкубируйте в течение 1–12 ч при 35 °C.
10. На втором этапе непосредственно поместите подготовленный мембранный фильтр на поверхность агара.
11. Инкубируйте фильтр в условиях, указанных выше.

Подсчёт колиформных бактерий

Плотность колиформных бактерий рассчитывают как общее число колиформных бактерий на 100 мл пробы.

Для экстраполяции результата используйте мембранные фильтры, содержащие 20–80 колоний колиформных бактерий, но не более 200 колоний всех типов на один мембранный фильтр.

Формула расчёта:

Общее число колиформных колоний/100 мл = число колиформных колоний / объём профильтрованной пробы, мл × 100

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Klebsiella aerogenes ранее обозначалась как Enterobacter aerogenes.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет и форма: гранулированная среда светло-розового или фиолетового цвета.

Гелеобразование

Степень гелеобразования: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри формируется гель красного цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция

Условия определения: реакция 5,1%-ного водного раствора с 2%-ным раствором спирта при 25 °C.

pH: 7,2 ± 0,2.

Контроль pH

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно действующим руководствам и локальным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Из-за различий в пищевых потребностях некоторые штаммы могут расти слабо.
2. При слишком высокой посевной нагрузке металлический блеск колоний может подавляться.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Требования после вскрытия: хранить продукт