Агар Мюллера-Хинтона № 2 HiMedia GM1084-500G (500 г)

Питательная агаризованная среда Агар Мюллера-Хинтона № 2 HiMedia GM1084-500G (500 г) производства HiMedia в гранулированной форме предназначена для стандартного определения чувствительности бактерий к антимикробным препаратам. Среда применяется методом дисков Bauer–Kirby для распространённых и быстрорастущих бактерий, но не рекомендуется для требовательных микроорганизмов без дополнительного обогащения.

Назначение

Агар Мюллера–Хинтона № 2 предназначен для тестирования чувствительности распространённых и быстрорастущих бактерий к антимикробным препаратам с использованием дисков по методу Bauer–Kirby. Среда содержит низкие уровни тимина, тимидина, кальция и магния, что необходимо для воспроизводимого определения чувствительности к сульфонамидам, триметоприму и аминогликозидным антибиотикам.

Материал предназначен для исследования чистых культур быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов, включая мочу, кал и кровь.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик функционирования.

* Эквивалент настоя из говяжьего сердца.
** Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация

Цель теста на чувствительность — спрогнозировать по результатам оценки in vitro вероятность успешного лечения инфекции пациента конкретным антимикробным препаратом.

Изначально формула агара Мюллера–Хинтона была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Впоследствии для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, заменившие агар Мюллера–Хинтона, однако среда получила широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера–Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда предназначена для диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждёнными методиками NCCLS, ныне CLSI — Института клинических и лабораторных стандартов.

Выбор агара Мюллера–Хинтона в качестве стандартной среды обусловлен следующими характеристиками:

1. Хорошая воспроизводимость результатов тестирования чувствительности от серии к серии.
2. Низкое содержание ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддержка роста большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Наличие большого объёма накопленных данных и практического опыта по оценке характеристик среды.

Агар Мюллера–Хинтона № 2 применяют для определения чувствительности быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов. Процедура с использованием одного диска с высокой концентрацией антимикробного препарата рекомендована Kirby–Bauer и соавторами. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера–Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Среда разработана с низким содержанием тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния скорректированы в соответствии с рекомендациями CLSI. Среда не рекомендуется для требовательных микроорганизмов. Тимин и тимидин ингибируют активность сульфонамидов и триметоприма, а кальций и магний влияют на активность аминогликозидных антибиотиков.

Сухие вещества настоя HM B и Acicase® обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.

Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, определённым по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазол/триметоприм (SXT). Концентрации ионов кальция и магния скорректированы для обеспечения количеств, рекомендованных CLSI, и получения корректных значений минимальной ингибирующей концентрации при тестировании аминогликозидов и Pseudomonas aeruginosa.

Метод Bauer–Kirby основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровой среде. Для каждого диска используется одна концентрация антимикробного препарата; измеренные диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации.

Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма равномерно наносят на всю поверхность среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с определённым количеством антимикробных препаратов, инкубируют посев и измеряют зоны подавления роста вокруг дисков.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 38,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм², что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Исследуемый материал

Тип образцов

Клинические образцы: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических материалов.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с утверждёнными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда предназначена только для тестирования чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулята может влиять на размер зоны подавления роста: слишком плотный инокулят может приводить к уменьшению зон, а недостаточная плотность — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде и могут нуждаться в добавлении крови.
4. Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. При определении чувствительности используются антибиотические диски; диски необходимо правильно хранить, поскольку условия хранения могут влиять на активность препаратов.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами лечения in vivo.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,7 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция

Реакция 3,8 % массо-объёмного водного раствора при 25 °C: pH 7,3 ± 0,1.

Ожидаемые характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении в соответствии с инструкцией на этикетке, использовании до истечения срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Культуральные характеристики и контроль чувствительности

Тесты на чувствительность к антибиотикам выполняют в соответствии с действующей ISO/TS 16782; результаты должны соответствовать установленным пределам приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Различные диски тестируют на стандартных штаммах ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с актуальным протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Диаметры зон для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Диаметры зон для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.