Агар для идентификации листерий (основа) (ПАЛКАМ) HiMedia GM1064-500G (500 г)

Агар для идентификации листерий (основа) (ПАЛКАМ) HiMedia GM1064-500G (500 г) — гранулированная питательная среда для выделения и идентификации видов Listeria. Агар применяется для селективного выделения Listeria из клинических, пищевых и водных образцов с инкубацией при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения и идентификации видов Listeria из клинических и не клинических образцов. Обозначение PALCAM расшифровывается как Polymyxin–Acriflavin–Lithium chloride–Ceftazidime–Aesculin–Mannitol Agar — агар с полимиксином, акрифлавином, хлоридом лития, цефтазидимом, эскулином и маннитолом.

Области применения:

• клинические образцы: фекалии, биологические жидкости;
• пищевые образцы;
• образцы воды.

Продукт имеет гранулированную физическую форму и предназначен для профессионального применения в микробиологических лабораториях.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Род Listeria включает виды Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Listeria seeligeri, Listeria welshimerii, Listeria innocua, Listeria grayi, Listeria murrayi и Listeria denitrificans. Виды L. monocytogenes и L. ivanovii связаны с заболеваниями человека; патогенность L. ivanovii считается неопределённой.

L. monocytogenes встречается в различных средах, включая нормальную микрофлору здоровых жвачных животных, желудочно-кишечный тракт бессимптомных носителей среди людей, речную воду, сточные воды, почву, силос, удобрения и разлагающуюся растительность.

Среда PALCAM была разработана Van Netten и соавторами и рекомендована для выделения L. monocytogenes из пищевых продуктов. Селективность среды обеспечивается хлоридом лития, цефтазидимом, полимиксином B и гидрохлоридом акрифлавина.

Дифференциальная индикация основана на двух системах:

• эскулин и цитрат железа аммония;
• маннитол и феноловый красный.

Функции компонентов среды:

• пептон служит источником углерода, азотистых веществ, аминокислот с длинной цепью, витаминов и необходимых факторов роста;
• декстроза (глюкоза), крахмал и маннитол являются источниками углеводов и энергии;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды;
• феноловый красный — индикатор pH, изменяющий окраску при изменении кислотности среды.

L. monocytogenes гидролизует эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин взаимодействует с цитратом аммонийного железа с образованием коричнево-чёрного комплекса, который проявляется в виде чёрного ореола вокруг колоний.

L. monocytogenes не ферментирует маннитол, тогда как контаминирующие энтерококки и стафилококки ферментируют маннитол; это проявляется изменением окраски среды с красной на жёлтую.

В микроаэрофильных условиях строгие аэробы, включая виды Bacillus и Pseudomonas, подавляются.

Добавление яичного желтка в концентрации 2,5 % об./об. к агару PALCAM описано как способствующее восстановлению повреждённых клеток. Среда с добавленной кровью при нанесении поверх агара PALCAM позволяет дифференцировать и подсчитывать гемолитические виды Listeria.

В зависимости от типа образца перед посевом на агар PALCAM следует использовать селективный обогатительный бульон:

• для молочных продуктов обычно используют селективную обогатительную среду для Listeria;
• для мяса и мяса птицы используют селективную обогатительную среду для Listeria UVM (M890A) и вторичный обогатительный бульон Фрейзера (M1083).

На агаре PALCAM колонии Listeria после посева и инкубации при 35 °C в течение 24–48 ч в аэробных или микроаэрофильных условиях имеют серо-зелёную окраску и чёрный осадок.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 34,44 г сухой среды в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки PALCAM Selective Supplement (FD061).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Сбор и обращение с образцами

• Для клинических образцов используйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.
• Для пищевых образцов применяйте методы отбора и обработки проб, предусмотренные соответствующими руководствами.
• Для образцов воды используйте методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативам.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать различные характеристики роста на среде.
2. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для применения с конкретным микроорганизмом, не указанным в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований.
3. Среда не является дифференциальной для идентификации видов Listeria; для различения видов требуется дополнительное биохимическое тестирование.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтая или розовая гранулированная среда.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,3 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора концентрацией 6,9 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают в микроаэрофильных условиях с добавлением селективной добавки PALCAM (FD061) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вслед