HiMedia GM078-500G Агар Клиглера железный

Питательная среда HiMedia GM078-500G Агар Клиглера железный производства HiMedia — гранулированный агар для дифференциальной идентификации грамотрицательных кишечных палочек. Применяется для анализа клинических и не клинических образцов по ферментации глюкозы, лактозы и образованию H₂S; масса упаковки составляет 500 г.

Идентификация продукта

Назначение

Среда предназначена для дифференциальной идентификации грамотрицательных кишечных палочек из клинических и не клинических образцов на основании ферментации глюкозы (декстрозы), лактозы и образования сероводорода (H₂S).

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам рабочих характеристик. HM Peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 57,52 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную поверхность с основанием-столбиком высотой около 25,4 мм (1″).

Наилучшие реакции получают на свежеприготовленной среде. Не используйте пробирки или флаконы с винтовыми крышками. Не допускайте перегрева, поскольку это может привести к образованию осадка в среде.

Принцип действия и интерпретация

Агар Клиглера железный представляет собой комбинацию среды с ацетатом свинца, описанной Клиглером, и агара Рассела с двумя сахарами. Среда используется для дифференциации брюшнотифозных, дизентерийных и родственных им палочек.

Феноловый красный служит индикатором pH и изменяет окраску в ответ на образование кислоты при ферментации сахаров. Агар Клиглера железный дифференцирует ферментирующие лактозу микроорганизмы от неферментирующих, а также позволяет различать Salmonella Typhi среди других представителей рода Salmonella, Salmonella Paratyphi A — среди Salmonella Scottmuelleri и Salmonella Enteritidis.

Ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, из-за чего индикатор изменяет цвет с красного на жёлтый. Поскольку содержание сахара, то есть декстрозы, невелико, образование кислоты ограничено. На поверхности среды происходит повторное окисление индикатора, поэтому она сохраняет красную окраску. При ферментации лактозы образуется большое количество кислоты, препятствующее повторному окислению индикатора, вследствие чего вся среда окрашивается в жёлтый цвет.

В состав среды, помимо пептона, HM Peptone B и дрожжевого экстракта, входят лактоза и глюкоза (декстроза), что обеспечивает дифференциацию видов кишечных палочек. Феноловый красный изменяет цвет в ответ на кислоту, образующуюся при ферментации сахаров.

Комбинация сульфата железа и тиосульфата натрия обеспечивает выявление образования сероводорода. Образование H₂S проявляется почернением всего столбика среды либо появлением чёрного кольца в верхней части столбика.

Неферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально вызывают пожелтение скошенной поверхности вследствие образования кислоты при ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После исчерпания глюкозы в аэробных условиях на скошенной поверхности реакция становится щелочной, и поверхность приобретает красную окраску вследствие окисления образовавшихся кислот. В анаэробных условиях столбика обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик остаётся кислым и жёлтым.

Микроорганизмы, ферментирующие лактозу, вызывают пожелтение скошенной поверхности и столбика. Большое количество образующейся кислоты поддерживает кислую реакцию среды также в аэробных условиях. Исходная окраска среды указывает на отсутствие ферментации глюкозы (декстрозы) и лактозы.

Газообразование, или аэрогенная реакция, выявляется по отдельным пузырькам, расслоению или смещению агара, а также по образованию трещин в столбике среды.

Для идентификации на агар Клиглера железного засевают чистые культуры предполагаемых микроорганизмов, выделенные на плотных средах, включая агар МакКонки (M081), бисмут-сульфитный агар (M027), дезоксихолат-цитратный агар (M065) и агар SS (M108).

Тип образца

Изолированные микроорганизмы из:

• клинических образцов;
• пищевых продуктов;
• молочных продуктов;
• проб воды.

Сбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно действующим руководствам и местным нормативным требованиям.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки согласно действующим руководствам.

Для клинических образцов соблюдайте установленные руководствами требования к обращению с образцами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Результаты следует оценивать через 18–24 ч, чтобы избежать ошибочной интерпретации.
2. Для инокуляции следует использовать прямую проволочную петлю.
3. Для предотвращения ошибочных результатов необходимо использовать чистые изоляты.
4. Для полной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных температурных условиях.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый гранулированный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной поверхности образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 5,75 % при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.