Гранулированная питательная среда HiMedia GM065-500G «Агар с дезоксихолатом цитрата» для селективного выделения кишечных патогенов, включая Salmonella и Shigella. Применяется для анализа клинических образцов и пищевых продуктов; не подлежит автоклавированию при приготовлении, поскольку чрезмерный нагрев ухудшает свойства среды.

Назначение

Селективная агаровая среда для выделения кишечных патогенов, прежде всего микроорганизмов родов Salmonella и Shigella, из клинических образцов и пищевых продуктов.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: GM065-500G
• Назначение изделия: агаровая питательная среда
• Тип продукта: гранулированный
• Физическая форма: гранулы
• Происхождение компонентов: животное
• Упаковка: флакон из ПЭВП (HDPE)
• Масса: 500 г
• Температура хранения: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Конечный pH: 7,5 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,30–7,70

Состав

Формула на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Твёрдые компоненты HI эквивалентны твёрдым компонентам сердечно-мозгового настоя.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 70,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Избегайте чрезмерного нагрева, поскольку он ухудшает свойства среды.
5. Охладите раствор до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Агар с дезоксихолатом цитрата приготовлен по модифицированной формуле Лейфсона. Среда предназначена для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов групп Salmonella и Shigella из пищевых продуктов.

При необходимости выделения Shigella рекомендуется использовать менее ингибирующую среду. Селективность агара с дезоксихолатом цитрата позволяет вносить достаточно большие посевные дозы без риска чрезмерного подавления Shigella и Salmonella сопутствующей микрофлорой.

Для рутинного исследования образцов кала и мочи рекомендуется использовать эту среду совместно с другими средами, например агаром МакКонки (M082) и висмут-сульфитным агаром (M027).

По сравнению с агаром с дезоксихолатом эта среда обладает более выраженной селективностью в отношении кишечных патогенов благодаря повышенной концентрации солей цитрата и дезоксихолата. Дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 ингибирует грамположительные бактерии. Цитратные соли в концентрации, предусмотренной рецептурой, ингибируют грамположительные бактерии и большинство других нормальных представителей кишечной микрофлоры.

Твёрдые компоненты HI служат источником углерода и азота; этот компонент используют, поскольку создаваемое им ингибирование колиформ выражено сильнее, чем при применении экстракта или простого пептона. Протеозопептон обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами.

Колиформные и грамположительные бактерии ингибируются или значительно подавляются дезоксихолатом натрия, цитратом натрия и цитратом аммония железа. Лактоза используется для дифференциации кишечных бацилл:

• бактерии, ферментирующие лактозу, образуют красные колонии;
• бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии;
• присутствующие колиформные бактерии образуют на среде розовые колонии.

Расщепление лактозы вызывает подкисление среды вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикатор pH нейтральный красный меняет цвет на красный. Такие колонии обычно также окружены мутной зоной осаждённой дезоксихолевой кислоты, образующейся в результате подкисления среды.

В кислой среде дезоксихолат натрия соединяется с нейтральным красным, в результате чего краситель выходит из раствора и одновременно происходит осаждение дезоксихолата.

Восстановление цитрата аммония железа до сульфида железа определяется по образованию чёрного сульфида железа. Виды Salmonella и Shigella не ферментируют лактозу, однако Salmonella может образовывать H₂S; в этом случае формируются бесцветные колонии с чёрными центрами или без них.

Сочетание цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, вследствие чего образуется мягкий неэластичный гель. После автоклавирования агар становится мягким, и штриховой посев Salmonella Gallinarum становится практически невозможным.

При увеличении концентрации дезоксихолата натрия до 0,1 % и более рост Salmonella Gallinarum подавляется. Поверхностные колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, часто поглощают небольшое количество красителя из среды и приобретают розоватый оттенок; из-за этого такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформы.

Типы образцов

• Клинические образцы кала.
• Клинические образцы мочи.
• Пищевые продукты.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам. Для пищевых образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• При необходимости обращайтесь к требованиям безопасности, приведённым в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать различные характеристики роста на этой среде.
2. Каждая серия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При необходимости выявления микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа, пользователь должен валидировать среду с учётом конкретных требований.
3. Для подтверждения вида необходима дополнительная биохимическая идентификация.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

Контроль качества

Внешний вид

Гранулированная среда от светло-жёлтого до розовато-бежевого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель красновато-оранжевого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция

Реакция 7,05%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,5 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM