Агар желчный с кристаллвиолетом и нейтральным красным HiMedia GM049-500G (уп/500 гр)

Селективная питательная агаровая среда HiMedia GM049-500G Агар желчный с кристаллвиолетом и нейтральным красным, 500 г (ФСЗ 2009/03709) предназначена для выявления и количественного определения бактерий группы кишечной палочки в воде, молоке, молочных и других пищевых продуктах, а также в клинических образцах. Среда выпускается в виде гранулированного сухого порошка и содержит желчные соли и кристаллвиолет для подавления сопутствующей грамположительной микрофлоры.

Назначение и область применения

Питательная среда рекомендована для селективного выделения, обнаружения и количественного определения бактерий группы коли-аэрогенов в следующих типах образцов:

• клинические образцы, включая кал;
• пищевые и молочные продукты;
• пробы воды.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 4832:2010 и ISO 11133:2014, поправка 2:2020. Среда также рекомендована APHA для определения и подсчёта бактерий группы кишечных палочек в воде, молоке, молочных и других пищевых продуктах.

В качестве индикатора бактерий группы кишечной палочки при исследовании молока среда сопоставима по назначению с бульоном МакКонки (M049A). Для повышения специфичности допускается применять двухслойный метод посева.

Принцип действия и интерпретация результатов

Группа кишечных палочек включает несколько родов бактерий семейства Enterobacteriaceae. Исторически определение этой группы основано на способности ферментировать лактозу. К группе относят аэробные и факультативно-анаэробные грамотрицательные неспорообразующие палочковидные бактерии, которые ферментируют лактозу с образованием газа и кислоты в течение 48 ч при 35 °C.

Желчно-кристаллвиолетово-нейтрально-красный лактозный агар является модификацией исходной прописи МакКонки и применяется для количественного определения бактерий группы коли-аэрогенов. Селективность обеспечивается кристаллвиолетом и смесью желчных солей, а дифференциация — системой «лактоза — нейтральный красный»:

• быстро ферментирующие лактозу микроорганизмы образуют пурпурно-красные колонии, окружённые пурпурными ореолами;
• неферментирующие лактозу или ферментирующие её поздно микроорганизмы образуют бледные колонии с зеленоватыми зонами;
• в исходном описании для быстро ферментирующих лактозу бактерий также указано образование красных колоний, окружённых красно-лиловым ореолом;
• рост других грамотрицательных бактерий можно дополнительно подавлять инкубированием в анаэробных условиях и/или при повышенной температуре — 42 °C и выше.

Среда не является полностью специфичной для представителей кишечной группы: другие сопутствующие бактерии могут давать аналогичную реакцию. Для окончательной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические тесты.

Функции компонентов среды:

• пептон и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, витаминов и других необходимых питательных веществ;
• лактоза является ферментируемым углеводом, использование которого приводит к образованию кислот;
• нейтральный красный выявляет образующуюся кислотность;
• кристаллвиолет и смесь желчных солей подавляют рост сопутствующей грамположительной и посторонней микрофлоры;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• агар формирует гелевую основу среды.

Состав среды

Состав по ISO: желчно-кристаллвиолетово-нейтрально-красный лактозный агар (VRBL)

Массовая концентрация компонентов:

Состав GM049: желчно-кристаллвиолетово-нейтрально-красный агар, гранулированный

Массовая концентрация компонентов:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности. Пептон эквивалентен ферментативному перевару тканей животного происхождения.

Приготовление среды и методика применения

1. Взвесьте 41,53 г гранулированной среды.
2. Суспендируйте навеску в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
3. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
4. Не автоклавируйте приготовленную среду в штатной процедуре.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Немедленно разлейте среду в стерильные чашки Петри, содержащие инокулят.

При необходимости среду допускается стерилизовать автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно установленным методическим указаниям.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно методическим указаниям и локальным нормативным требованиям.

Для клинических образцов используйте соответствующие процедуры обращения с материалом согласно утверждённым методическим указаниям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

Внутренняя крышка флакона не требует дополнительного укупоривания.

Контроль качества

Внешний вид

Гранулированная среда от светло-жёлтого до розового цвета. В исходном описании продукта внешний вид указан как однородный сухой гранулированный порошок жёлтого цвета.

Гелеобразование

Среда образует плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется красновато-лиловый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция и pH

Реакцию определяют для 4,15 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

• pH: 7,4 ± 0,2;
• диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Характеристики продуктивности учитывают после инкубации при 30 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч. Степень восстановления принимают равной 100 % для роста бактерий на референсной среде — триптон-соевом агаре.

Характеристики селективности учитывают после инкубации при 30 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Характеристики специфичности учитывают после инкубации при 30 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.