Гранулированная основа агара Бэрд-Паркера HiMedia GM043I-500G предназначена для приготовления селективной питательной среды с концентрацией 58,0 г/л. Основа применяется для количественного определения коагулазоположительных стафилококков в пищевых продуктах и кормах для животных с добавлением эмульсии яичного желтка и селективных добавок.

Назначение

Основа агара Бэрд-Паркера рекомендована для количественного определения коагулазоположительных стафилококков в пищевых продуктах и кормах для животных. Состав и рабочие характеристики соответствуют требованиям ISO 6888-1:1999 / Amd. 2:2018 и ISO 11133:2014 / Amd. 2:2020.

Состав

Спецификация агара Бэрд-Паркера по ISO

Содержание компонентов указано на 1 л среды.

Гранулированная основа агара Бэрд-Паркера GM0431

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Эквивалент панкреатического переварa казеина.

Эквивалент мясного экстракта.

Добавки после автоклавирования

Добавки указаны из расчёта на 1000 мл среды.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 58,0 г сухой гранулированной основы в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка FD045 и 10 мл стерильной селективной добавки PTe 1 % — 1 мл на флакон, FD052.
6. При необходимости добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки BP S FD069.
7. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Агар Бэрд-Паркера разработан Baird Parker на основе теллурит-глициновой формулы Zebovitz и применяется для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и других материалах, поскольку обеспечивает их дифференциацию.

Между коагулазным тестом и появлением прозрачной зоны липолиза на этой среде установлена высокая корреляция. Прозрачная зона образуется вследствие действия лецитиназы стафилококков, расщепляющей яичный желток. Практически 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит с образованием чёрных колоний, тогда как другие стафилококки не всегда обладают такой способностью.

Идентификация Staphylococcus aureus, выделенного на агаре Бэрд-Паркера, должна быть подтверждена коагулазной реакцией. Агар Бэрд-Паркера также можно использовать для выявления коагулазной активности с добавлением плазмы фибриногена.

Добавление 50 мг/л сульфаметазина подавляет рост и роение видов Proteus.

Триптон, экстракт HM и дрожжевой экстракт являются источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus, снижая селективность среды. Хлорид лития и теллурит калия подавляют большинство сопутствующей микрофлоры, за исключением Staphylococcus aureus.

Добавка теллурита токсична для штаммов, образующих зоны просветления яичного желтка, кроме Staphylococcus aureus, и придаёт колониям серую или чёрную окраску. Глицин и пируват усиливают рост стафилококков.

После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной. Эмульсия яичного желтка обогащает среду и помогает идентифицировать микроорганизмы по лецитиназной активности — реакции на яичный желток. Прозрачная зона и серо-чёрные колонии на этой среде являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков. При дальнейшем инкубировании вокруг колоний развивается непрозрачная зона, которая может быть обусловлена липолитической активностью.

Контроль среды проводят в соответствии с ISO 11133:2014.

Тип образца

• Пищевые продукты.
• Корма для животных.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки образцов согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

Идентификация Staphylococcus aureus, выделенного на агаре Бэрд-Паркера, должна быть подтверждена коагулазной реакцией.

Условия работы и критерии эффективности

Рабочие характеристики среды ожидаются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид: гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды:

• базовая среда — прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета;
• после добавления эмульсии яичного желтка и раствора теллурита — жёлтый непрозрачный гель в чашках Петри.

Реакция: реакция 5,8%-ного водного раствора при 25 °C; pH 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральную реакцию наблюдали после добавления эмульсии яичного желтка FD045 и стерильной селективной добавки PTe 1 % FD052 при инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2–48 ± 2 ч. Коэффициент восстановления принимают за 100 % для роста бактерий на эталонной среде — соево-казеиновом агаре (триптиказо-соевом агаре).

Специфичность

Культуральную реакцию наблюдали после добавления эмульсии яичного желтка FD045 и стерильной селективной добавки PTe 1 % FD052 при инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24–48 ± 2 ч.

Селективность

Культуральную реакцию наблюдали после добавления эмульсии яичного желтка FD045 и стерильной селективной добавки PTe 1 % FD052 при инкубации при 37 ± 1 °C в течение 48 ± 2 ч.