HiMedia GM043-500G Основа агара Бэрд-Паркера

Гранулированная основа агара Бэрд-Паркера HiMedia GM043-500G предназначена для приготовления селективной питательной среды с конечным pH 7,0 ± 0,2. Применяется для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков из пищевых, молочных и клинических образцов при температуре хранения 10–30 °C.

Назначение

Основа агара Бэрд-Паркера HiMedia GM043-500G рекомендована для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков из пищевых и клинических образцов.

• Форма: гранулированная
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Масса: 500 г
• Происхождение компонентов: животное
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных параметров эффективности.

# Эквивалент мясного экстракта.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 63,0 г сухой гранулированной основы в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 50 °C.
5. В асептических условиях добавьте один из вариантов селективных компонентов:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка FD045 и 3 мл стерильной селективной добавки PTe 3,5 % FD047 (1 мл на флакон);
   • либо 50 мл эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046 (100 мл на флакон).
6. При необходимости повышения селективности добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки BP S FD069.
7. Для идентификации коагулазоположительных стафилококков вместо эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046 можно использовать один флакон ингибитора FPT FD195 на 90 мл среды.
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Агар Бэрд-Паркера разработан на основе теллурит-глициновой рецептуры для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и других материалах. Среда обеспечивает дифференциацию коагулазоположительных штаммов.

Между результатом коагулазной реакции и образованием прозрачной зоны липолиза на среде выявляется высокая корреляция. Прозрачная зона формируется вследствие действия лецитиназы стафилококков, расщепляющей яичный желток. Почти 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, в результате чего образуются чёрные колонии; другие стафилококки не всегда обладают такой способностью.

Среда менее ингибирующая для Staphylococcus aureus, чем другие среды, и одновременно обеспечивает более высокую селективность.

Идентичность выделенного на агаре Бэрд-Паркера Staphylococcus aureus должна быть подтверждена коагулазной реакцией. Среда также может использоваться для выявления коагулазной активности при добавлении плазмы с фибриногеном.

Для определения коагулазной активности содержимое добавки с плазмой фибриногена и ингибитором трипсина FD195 растворяют в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавляют к 90 мл стерильной расплавленной среды, охлаждённой до 45–50 °C. На такой среде через 24–48 ч инкубации при 35 °C коагулазоположительные колонии приобретают окраску от белой до серо-чёрной и окружены непрозрачной зоной вследствие коагулазной активности.

В отсутствие эмульсии яичного желтка восстановление теллурита является необходимым. В результате образуется прозрачный агар, а колонии стафилококков имеют белую или серую окраску.

Для количественного определения отбирают чашки с 20–200 колониями. Колонии, сходные с колониями Staphylococcus aureus, подсчитывают и исследуют на коагулазную реакцию. Результат указывают как количество Staphylococcus aureus на 1 г пищевого продукта.

Добавление сульфаметазина в концентрации 50 мг/л подавляет рост и роение видов Proteus.

Функции компонентов

• Триптон, пептон HM B и дрожжевой экстракт служат источниками азота, углерода, серы и витаминов.
• Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus, не снижая селективность среды.
• Хлорид лития и теллурит калия ингибируют большинство сопутствующих микроорганизмов, за исключением Staphylococcus aureus.
• Добавка теллурита токсична для расщепляющих яичный желток штаммов, отличных от S. aureus, и придаёт колониям чёрную окраску.
• Глицин и пируват усиливают рост стафилококков.
• После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной.
• Эмульсия яичного желтка обогащает среду и позволяет выявлять лецитиназную активность по реакции с яичным желтком.
• Прозрачная зона и серо-чёрные колонии являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков.
• При дальнейшем инкубировании вокруг колоний формируется непрозрачная зона, которая может быть обусловлена липолитической активностью.

Методика посева и учёта

1. Исследуемый материал внесите в количестве 0,1 мл на чашку Петри диаметром 90–100 мм.
2. Инкубируйте посевы при 37 °C.
3. Первичный учёт выполните через 24–26 ч.
4. Колонии Staphylococcus aureus имеют чёрную блестящую окраску, тонкий белый ободок и окружены прозрачной зоной.
5. Продолжите инкубацию при 37 °C ещё 24 ч.
6. На колониях с указанными характеристиками, сформировавшихся в течение дополнительного периода инкубации, выполните коагулазную реакцию.
7. Чашки используйте в день приготовления или в течение 48 ч, чтобы избежать потери чёткости преципитационных зон.

Базальная среда без эмульсии яичного желтка и теллурита отличается высокой стабильностью. Колонии некоторых сопутствующих организмов могут разрушать ореол коагулазной реакции. На среде могут расти и другие бактерии; биохимические тесты позволяют отличить коагулазоположительные стафилококки от других микроорганизмов.

Типы образцов

• Клинические образцы: гной, материал из ран.
• Пищевые и молочные образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно установленным руководствам.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Хотя среда рекомендована для выявления коагулазоположительного Staphylococcus aureus, на ней могут расти другие бактерии.
2. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать различный характер роста на среде.
3. Каждая серия среды проверяется на стандартных штаммах; небольшие различия в росте могут зависеть от источника выделения исследуемого микроорганизма.

Контроль качества

Внешний вид

Однородная гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базальная среда: жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• После добавления эмульсии яичного желтка и эмульсии теллурита: в чашках Петри формируется жёлтый непрозрачный гель.

Реакция среды

Реакция 6,3%-ного водного раствора при 25 °C:

• pH: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч. Степень восстановления принимают равной 100 % для роста бактерий на соево-казеиновой агаровой среде.