Основа агара Бэрд-Паркера HiMedia GM043-500G предназначена для выделения и подсчета коагулаза-положительных стафилококков из пищевых и клинических образцов. Среда обеспечивает дифференциацию штаммов за счет определения лецитиназной активности и способности восстанавливать теллурит.

Принцип измерения

Среда Бэрд-Паркера разработана для селективного выделения стафилококков. Основные механизмы дифференциации:

• Лецитиназная активность: лецитиназа стафилококков расщепляет яичный желток, что приводит к образованию прозрачной зоны липолиза вокруг колоний.
• Восстановление теллурита: почти 100 % коагулаза-положительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, в результате чего колонии приобретают черный цвет.
• Селективность: хлорид лития и теллурит калия подавляют рост большинства contaminating-микрофлоры.

Триптон, пептон HM B и дрожжевой экстракт служат источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает поврежденные клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus без потери селективности. Глицин и пируват дополнительно усиливают рост стафилококков.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендировать 63,0 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 50 °C.
5. В асептических условиях добавить один из вариантов добавок:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка (FD045) и 3 мл стерильной селективной добавки PTe 3,5 % (FD047) (по 1 мл на флакон).
   • Либо 50 мл эмульсии яичного желтка Tel (FD046).
   • Для повышения селективности можно добавить содержимое одного флакона селективной добавки BP S (FD069).
   • В качестве альтернативы для идентификации коагулаза-положительных стафилококков вместо эмульсии яичного желтка Tel (FD046) можно использовать 1 флакон ингибитора FPT (FD195) на 90 мл среды.
6. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Процедура анализа

1. Инокулировать исследуемый материал (0,1 мл на чашку диаметром 90–100 мм).
2. Инкубировать при 37 °C.
3. Первый считываемый результат получить через 24–26 часов. Колонии Staphylococcus aureus характеризуются черным блестящим видом с тонким белым ободком и прозрачной зоной вокруг.
4. Продолжить инкубацию при 37 °C еще в течение 24 часов.
5. Провести тест на коагулазу для колоний с вышеуказанными характеристиками.

Определение активности коагулазы с помощью фибриногеновой плазмы

Для обнаружения коагулазной активности в среду добавляют ингибитор трипсина фибриногеновой плазмы (FD195), растворенный в 10 мл стерильной дистиллированной воды, в 90 мл стерильной расплавленной среды (при температуре 45–50 °C). При инкубации в течение 24–48 часов при 35 °C коагулаза-положительные колонии выглядят от белого до серо-черного цвета и окружены непрозрачной зоной.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Эквивалент мясного экстракта. Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Общие параметры

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Вид: однородная гранулированная среда от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотное, сопоставимо с 2,0 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность: базовая среда представляет собой желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель. После добавления эмульсии яичного желтка и теллурита образуется желтый непрозрачный гель.
• Реакция: pH 6,80–7,20 (водный раствор 6,3 % мас./об. при 25 °C).

Культуральные характеристики

Наблюдались после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов. Скорость восстановления считается 100 % для роста бактерий на сое-казеиновом digested-агаре.

Область применения

• Клинические образцы: гной, мазки из ран.
• Пищевые образцы: продукты питания и молочная продукция.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой среды: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищенном от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.
• Особенности: из-за гигроскопичности продукта после открытия флакон необходимо плотно закрыть во избежание образования комков.
• Срок использования готовых чашек: в день приготовления или в течение 48 часов для предотвращения потери четкости зон осаждения.

Ограничения и предупреждения

• Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального использования.
• Несмотря на селективность к Staphylococcus aureus, возможен рост других бактерий.
• Индивидуальные организмы могут демонстрировать вариативность паттернов роста.
• Требуется соблюдение стандартных мер предосторожности при работе с клиническими образцами и культурами.
• Загрязненные материалы перед утилизацией должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации.