Селективная питательная среда Висмут-сульфитный агар, гранулированный HiMedia GM027-500G (500 г) для изоляции и подсчета видов Salmonella из образцов пищевых продуктов. Состав и критерии эффективности среды соответствуют спецификациям стандарта ISO 6579-1:2017.
Принцип измерения и интерпретация
Среда представляет собой модификацию оригинального метода Уилсона и Блэра. Висмут-сульфитный агар рекомендуется для изоляции и предварительной идентификации Salmonella Typhi и других видов Salmonella из патологических материалов, сточных вод, воды, пищевых продуктов и других объектов.
- Механизм селективности: Индикатор висмут-сульфит совместно с бриллиантовым зеленым подавляет рост кишечных грамположительных и грамнотрицательных бактерий.
- Индикация: S. Typhi, S. Enteritidis и S. Typhimurium обычно растут в виде черных колоний (с металлическим блеском или без него), что обусловлено продукцией сероводорода (H₂S) и восстановлением сульфита до черного сульфида железа (III). Salmonella Paratyphi A образует светло-зеленые колонии.
- Особенности: Среда обладает уникальным ингибирующим действием в отношении грамположительных организмов и колиформ, что позволяет использовать более высокую посевную дозу по сравнению с другими селективными средами.
Важное ограничение: Висмут-сульфитный агар может подавлять рост некоторых штаммов Salmonella, поэтому его не следует использовать как единственную селективную среду для данных организмов.
Состав
Спецификация ISO 6579-1
| Компонент | г/л |
|---|
| Ферментативный гидролизат тканей животных | 10,000 |
| Мясной экстракт | 5,000 |
| Декстроза | 5,000 |
| Гидрофосфат натрия двуводный, безводный | 4,000 |
| Сульфат железа (II), безводный | 0,300 |
| Висмут-сульфитный индикатор | 8,000 |
| Бриллиантовый зеленый | 0,025 |
| Агар | 20,000 |
| Конечный pH (при 25 °C) | 7,7 ± 0,2 |
Bismuth Sulphite Agar, Granulated®
| Компонент | г/л |
|---|
| Пептон | 10,000 |
| Экстракт HM | 5,000 |
| Декстроза (глюкоза) | 5,000 |
| Гидрофосфат натрия двуводный, безводный | 4,000 |
| Сульфат железа (II), безводный | 0,300 |
| Висмут-сульфитный индикатор | 8,000 |
| Бриллиантовый зеленый | 0,025 |
| Агар | 20,000 |
| Конечный pH (при 25 °C) | 7,7 ± 0,2 |
Методика проведения анализа
Подготовка среды
- Суспендируйте 52,33 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
- Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
- ВНИМАНИЕ: Не стерилизуйте среду в автоклаве или методом фракционного стерилизации; перегрев разрушает селективные свойства среды.
- Перед разливом в стерильные чашки Петри обеспечьте равномерное распределение осадка висмут-сульфита в конечном геле.
Работа с образцами
Типы образцов: клинические образцы (фекалии), образцы мяса и пищевых продуктов, молоко и молочные продукты, корма для животных, фекалии животных, пробы окружающей среды.
Процедура:
- Предварительное обогащение: Образцы (25 г в 225 мл) обогащают в буферной пептонной воде (M14941) при температуре 34–38 °C в течение 18 ± 2 ч.
- Селективное обогащение: 0,1 мл предварительно обогащенного образца инокулируют в 10 мл бульона RVS (M14481) или агар MSRV (M1428) и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Также 1 мл культуры инокулируют в бульон MKTT (M1496I) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Для S. Typhi и S. Paratyphi A используют бульон с селенистым цистином (инкубация при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч и 48 ± 3 ч).
- Изоляция: Полученную культуру высевают на висмут-сульфитный агар (BS) (M027) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Рекомендуется дополнительная инкубация еще на 24 ± 3 ч. Параллельно проводят посев на модифицированный агар XLD (M0311).
- Подтверждение: Для подтверждения результатов проводят биохимические и серологические тесты.
Технические характеристики
| Параметр | Значение |
|---|
| Происхождение компонентов | Животное |
| Тип продукта | Гранулированный |
| Физическая форма | Гранулы |
| Тип упаковки | ПНД (HDPE) |
| Цвет готовой среды | Желтовато-зеленый, опалесцирующий, с хлопьевидным осадком |
| pH (5,23% раствор при 25 °C) | 7,7 ± 0,2 |
| Диапазон pH | 7,50–7,90 |
| Желирование | Плотное (сопоставимо с 2,0% агаром) |
Контроль качества и культуральные характеристики
Инкубация при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч с дополнительной инкубацией еще на 24 ± 3 ч. Восстановление 100 % считается по росту на сое-казеиновом-пептонном агаре.
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Цвет колонии |
|---|
| Продуктивность | | | | |
| Salmonella Typhimurium ATCC 14028 | 50–100 | хороший | ≥ 50 % | Коричневые, серые или черные колонии, обычно с металлическим блеском через 24 ч, становятся равномерно черными через 48 ч. |
| Salmonella Enteritidis ATCC 13076 | 50–100 | хороший | ≥ 50 % | Коричневые, серые или черные колонии, обычно с металлическим блеском через 24 ч, становясь равномерно черными через 48 ч. |
| Селективность и специфичность | | | | |
| Escherichia coli ATCC 8739 | ≥104 | рост или частичное ингибирование | | Тускло-зеленые или коричневые колонии без металлического блеска |
| Escherichia coli ATCC 25922 | ≥104 | рост или частичное ингибирование | | Тускло-зеленые или коричневые колонии без металлического блеска |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | ≥104 | ингибирован | 0 % | - |
| Enterococcus faecalis ATCC 19433 | ≥104 | ингибирован | 0 % | - |
Дополнительные тесты
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Цвет колонии |
|---|
| Salmonella Typhi ATCC 6539 | 50–100 | хороший | ≥ 50 % | Коричневые, серые или черные колонии, обычно с металлическим блеском через 24 ч, становясь равномерно черными через 48 ч. |
| Salmonella Paratyphi A ATCC 9150 | 50–100 | хороший | ≥ 50 % | Коричневые, серые или черные колонии, обычно с металлическим блеском через 24 ч, становясь равномерно черными через 48 ч. |
Условия эксплуатации и хранения
- Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков.
- Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
- Утилизация: использованные среды и материалы, контактировавшие с образцами, подлежат деконтаминации путем автоклавирования или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.
Ограничения применения
- Запрещено автоклавировать или перегревать среду, так как это уничтожает её селективные свойства.
- S. Typhi и S. Arizonae могут образовывать типичные коричневые колонии с металлическим блеском или без него.
- Высокая селективность среды требует её использования параллельно с менее селективными средами для полноценной изоляции.
- При массивном посеве некоторых видов Salmonella могут наблюдаться типичные черные колонии с блеском, в то время как изолированные колонии могут выглядеть зелеными.