Висмут-сульфитный агар, гранулированный HiMedia GM027-500G (500 г)

Гранулированная питательная среда Висмут-сульфитный агар, гранулированный HiMedia GM027-500G (500 г) производства HiMedia предназначена для селективного выделения и количественного определения видов Salmonella из пищевых образцов. Среда применяется для анализа пищевых продуктов, клинического материала и объектов окружающей среды, однако может подавлять отдельные штаммы Salmonella и не должна использоваться как единственная селективная среда.

Назначение и область применения

Висмут-сульфитный агар применяется для селективного выделения и количественного определения видов Salmonella из пищевых образцов в соответствии с требованиями ISO 6579-1:2017.

Типы исследуемых образцов:

• клинический материал: фекалии;
• пищевые продукты и мясо;
• молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных;
• образцы окружающей среды.

Среда предназначена для профессионального применения и диагностики вне организма. При работе с образцами и культурами необходимо соблюдать стандартные правила микробиологической лаборатории и установленные процедуры обращения с инфекционными материалами.

Состав

Спецификация ISO 6579-1

Состав на 1 л среды:

Гранулированный висмут-сульфитный агар

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик эффективности.

Обозначения компонентов:

• пептон эквивалентен ферментативному перевару тканей животного происхождения;
• экстракт HM эквивалентен мясному экстракту.

Состав на 1 л среды:

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар.
• Масса: 500 г.
• Конечный pH при 25 °C: 7,7 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,50–7,90.
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 5,23 % масс./об.
• Состояние среды: гранулированная.
• Внешний вид: от светло-жёлтого до зеленовато-жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,0 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: зеленовато-жёлтая, опалесцирующая; в чашках Петри образуется хлопьевидный осадок.

Принцип действия и интерпретация

Виды Salmonella относятся к таксономически сложной группе бактерий семейства Enterobacteriaceae. Инфицирование человека чаще всего происходит при употреблении пищи, воды или молока, загрязнённых экскрементами человека или животных. Единственным резервуаром S. Typhi являются люди.

Висмут-сульфитный агар представляет собой модификацию среды Уилсона и Блэра. Среда используется для выделения и предварительной идентификации Salmonella Typhi и других видов Salmonella из патологического материала, сточных вод, воды, пищевых продуктов и других образцов. Для выделения и количественного определения видов Salmonella из пищевых образцов среда применяется в соответствии с ISO 6579-1:2017.

Типичные признаки роста:

• S. Typhi, S. Enteritidis и S. Typhimurium обычно образуют чёрные колонии с окружающим металлическим блеском или без него;
• чёрная окраска обусловлена образованием сероводорода и восстановлением сульфита до чёрного сульфида железа;
• Salmonella Paratyphi A образует светло-зелёные колонии;
• S. Typhi и S. Arizonae могут образовывать типичные коричневые колонии с металлическим блеском или без него;
• при массивном посеве некоторые виды Salmonella формируют типичные чёрные колонии с металлическим блеском, тогда как изолированные колонии могут быть зелёными.

Функции компонентов среды:

• пептон и экстракт HM служат источниками углерода, азота, аминокислот с длинной цепью, витаминов и факторов роста;
• декстроза является источником углерода;
• фосфат натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• индикатор сульфита висмута и бриллиантовый зелёный подавляют рост кишечных грамположительных и грамотрицательных бактерий;
• сульфат железа способствует выявлению образования сероводорода;
• для пищевых образцов перед посевом выполняют предварительное обогащение.

Среда обладает выраженной селективностью и специфическим ингибирующим действием в отношении грамположительных микроорганизмов и колиформ. По сравнению с другими селективными средами допускается использование большей посевной дозы.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 52,33 г гранулированной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте среду в автоклаве и не используйте дробную стерилизацию: перегрев может разрушить селективность среды.
4. Перед разливом в стерильные чашки Петри обеспечьте равномерное распределение осадившегося сульфита висмута в конечном геле. Чувствительность среды в значительной степени зависит от равномерности распределения этого осадка.
5. Разлейте приготовленную среду в стерильные чашки Петри.

Подготовка и обработка образцов

Предварительное обогащение

Для пищевых образцов:

1. Поместите 25 г образца в 225 мл буферной пептонной воды M14941.
2. Инкубируйте при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. Внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл бульона RVS M14481 или на агар MSRV M1428.
2. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Внесите 1 мл полученной культуры в бульон MKTT M1496I.
4. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Для Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi A селективное обогащение выполняйте в селенит-цистиновом бульоне с последующей инкубацией при 37 ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч и 48 ч ± 3 ч.

Выделение

1. Полученную после селективного обогащения культуру высейте на висмут-сульфитный агар (BS) M027.
2. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Рекомендуется дополнительная инкубация в течение ещё 24 ± 3 ч.
4. Одновременно выполните посев на модифицированный агар XLD M0311.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты.

При исследовании клинических образцов необходимо использовать соответствующие методики обращения с образцами, установленные действующими лабораторными руководствами.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивали после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Затем чашки дополнительно инкубировали ещё 24 ± 3 ч. Степень восстановления принята за 100 % для роста бактерий на соево-казеиновом агаре.