HiMedia GM024-500G Основа агара с цетримидом
Гранулированная основа питательной среды HiMedia GM024-500G «Основа агара с цетримидом» производства HiMedia предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa и имеет конечный pH 7,2 ± 0,2. Основа применяется при анализе клинических образцов и воды, а также для контроля косметической продукции и эффективности дезинфицирующих средств; цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, поэтому отдельные штаммы могут расти слабо или не расти.
Описание
Гранулированная основа питательной среды HiMedia GM024-500G «Основа агара с цетримидом» производства HiMedia предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa и имеет конечный pH 7,2 ± 0,2. Основа применяется при анализе клинических образцов и воды, а также для контроля косметической продукции и эффективности дезинфицирующих средств; цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, поэтому отдельные штаммы могут расти слабо или не расти.
Назначение
Среда предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa из клинических образцов. Также применяется для:
- исследования клинических образцов;
- анализа проб воды;
- examination косметической продукции на наличие Pseudomonas aeruginosa;
- оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении Pseudomonas aeruginosa.
Технические характеристики
| Параметр | Значение |
|---|---|
| Производитель | HiMedia |
| Артикул | GM024-500G |
| Назначение изделия | Основа агара с цетримидом |
| Тип продукта | Гранулированный |
| Физическая форма | Гранулы |
| Материал упаковки | Полиэтилен высокой плотности (HDPE) |
| Вес | 500 г |
| Происхождение компонентов | Животное |
| Температура хранения сухой среды | 10–30 °C |
| Температура хранения приготовленной среды | 20–30 °C |
| Конечный pH при 25 °C | 7,2 ± 0,2 |
| Диапазон pH | 7,00–7,40 |
Состав
Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.
| Компонент | г/л |
|---|---|
| Желатиновый пептон | 20,000 |
| Хлорид магния | 1,400 |
| Сульфат калия | 10,000 |
| Цетримид | 0,300 |
| Агар | 15,000 |
| Конечный pH при 25 °C | 7,2 ± 0,2 |
Методика приготовления среды
- Взвесьте 46,7 г сухой среды.
- Суспендируйте препарат в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
- Нагрейте суспензию до кипения, чтобы полностью растворить среду.
- Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм², что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
- Охладите среду до 45–50 °C.
- При необходимости асептически добавьте к 1000 мл среды восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки NA Selective Supplement FD130.
- Тщательно перемешайте.
- Разлейте среду в стерильные чашки Петри.
Принцип действия и интерпретация
Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных средах, однако для специфического выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, а также источников человеческого, животного или растительного происхождения используют среду с селективным агентом и компонентами, усиливающими образование пигмента. Действие большинства селективных сред основано на природной устойчивости отдельных видов к различным антибактериальным веществам. Цетримид подавляет рост многих микроорганизмов и позволяет Pseudomonas aeruginosa формировать типичные колонии.
Цетримид представляет собой четвертичную аммониевую соль, действующую как катионное поверхностно-активное вещество. В месте контакта цетримид снижает поверхностное натяжение и оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее воздействие на белки бактериальной мембраны. Цетримид подавляет широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.
King и соавторы разработали среду A для усиления образования пиоцианина бактериями рода Pseudomonas. Агар с цетримидом, разработанный Lowbury, представляет собой модификацию технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетри мида для селективного выделения P. aeruginosa. После появления высокоочищенного цетри мида его концентрацию в среде уменьшили. Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч.
P. aeruginosa может быть идентифицирована по характерному образованию пиоцианина — синего, водорастворимого нефлуоресцирующего феназинового пигмента, — в сочетании с морфологией колоний и характерным виноградоподобным запахом аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas или грамотрицательной палочкой, выделяющей пиоцианин. Поэтому среды с цетримидом имеют значение для идентификации P. aeruginosa.
Желатиновый пептон обеспечивает P. aeruginosa необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Хлорид магния и сульфат калия стимулируют образование пиоцианина.
Пробоподготовка и посев
Для выделения P. aeruginosa чашки с агаром с цетримидом следует инокулировать из неселективной среды, например из бульона для инфузии мозга и сердца (M210) или среды для переваривания казеина соевыми бобами (M011). При высокой концентрации микроорганизмов исследуемую пробу можно непосредственно инокулировать на агар с цетримидом.
Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными — синими или сине-зелёными — либо непигментированными. Колонии, флуоресцирующие при 250 нм и имеющие сине-зелёную пигментацию, считают предположительно положительными. P. aeruginosa может терять флуоресценцию под ультрафиолетом, если культуры остаются при комнатной температуре в течение короткого времени. После повторной инкубации чашек флуоресценция появляется снова. Тип пептона, использованного в основе, также может влиять на образование пигмента.
Типы образцов
- Клинические образцы: моча, материал из ран.
- Образцы воды.
Сбор и обращение с образцами
Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.
Для проб воды используйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным нормативным требованиям.
После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.
Ограничения метода
- Среда является селективной; некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост, поскольку цетримид обладает высокой токсичностью.
- Для окончательного подтверждения результатов необходимо выполнить дополнительные биохимические тесты.
- Некоторые штаммы P. aeruginosa могут не образовывать пиоцианин.
- Другие виды Pseudomonas не образуют пиоцианин, но могут флуоресцировать под ультрафиолетовым светом.
- Большинство видов, не относящихся к Pseudomonas, подавляются на агаре с цетримидом; отдельные виды Pseudomonas также могут подавляться.
- Некоторые неферментирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут образовывать на этой среде водорастворимую окраску от светло-коричневой до коричневой.
- Бактерии рода Serratia могут образовывать розовую пигментацию.
- Для подтверждения результатов следует проводить биохимические тесты и серологические процедуры.
Контроль качества
Внешний вид
Однородная гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.
Гелеобразование
Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
Цвет и прозрачность приготовленной среды
В чашках Петри образуется опалесцирующий гель светло-янтарного цвета с небольшим осадком.
Реакция среды
Реакция 4,67%-ного водного раствора, содержащего 1 % глицерина, при 25 °C: pH 7,2 ± 0,2.
Культуральные характеристики
Культуральные характеристики оценивали после инкубации при 30–35 °C в течение указанного периода. Степень восстановления принимается равной 100 % для роста бактерий на агаре соево-казеинового переваривания.
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Наблюдаемое значение в партии (КОЕ) | Восстановление | Температура инкубации | Период инкубации |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Pseudomonas paraaeruginosa ATCC 9027 (00026*) | 50–100 | обильный | 25–100 | ≥50 % | 30–35 °C | ≤18 ч |
| Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) | ≥10⁴ | подавлен | 0 | 0 % | 30–35 °C | ≥72 ч |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (00025*) | 50–100 | обильный | 25–100 | ≥50 % | 30–35 °C | 18–24 ч |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 25668 (00114*) | 50–100 | обильный | 25–100 | ≥50 % | 30–35 °C | 18–24 ч |
| Stenotrophomonas maltophila ATCC 13637 | ≥10⁴ | подавлен | 0 | 0 % | 30–35 °C | ≥72 ч |
| Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) | ≥10⁴ | подавлен | 0 | 0 % | 30–35 °C | ≥72 ч |
| Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 6538 (00032*) |
Характеристики
Производитель/Серия
| Производитель | HiMedia |
|---|
Назначение изделия
| Назначение изделия | Основа |
|---|
Габариты и вес
| Вес | 500г |
|---|
