HiMedia GM021-500G Трехсахарный железный агар

Питательная среда HiMedia GM021-500G Трехсахарный железный агар предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы, а также образованию сероводорода. Трехсахарный железный агар применяют для исследования чистых бактериальных изолятов из воды, пищевых продуктов и клинических образцов; масса упаковки составляет 500 г.

Идентификация продукта

Назначение

Трёхсахарный железный агар (TSI) предназначен для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по следующим признакам:

• ферментация декстрозы;
• ферментация лактозы;
• ферментация сахарозы;
• образование сероводорода (H₂S).

Среду применяют для исследования мяса и пищевых продуктов, молока и молочных продуктов, подтверждения наличия Salmonella при микробиологическом предельном тесте, а также для идентификации грамотрицательных бацилл. Среда соответствует рекомендациям APHA в части указанных методов исследования.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Назначение изделия: агар
• Масса: 500 г

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 64,52 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин; ориентировочное давление — около 0,103 МПа (15 фунтов давления).
5. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав скошенную часть и столбик длиной около 1 дюйма (25,4 мм).

Для получения лучших результатов допускается стерилизация автоклавированием при температуре 115 °C в течение 15 мин; ориентировочное давление — около 0,069 МПа (10 фунтов давления).

Принцип измерения и интерпретация

Трёхсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и модифицирован Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae.

Триптон, пептон, дрожжевой экстракт и пептон HM B обеспечивают среду азотистыми соединениями, серой, микроэлементами и витаминами группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Лактоза, сахароза и декстроза являются ферментируемыми углеводами. Тиосульфат натрия и ионы железа образуют индикаторную систему для выявления H₂S. Феноловый красный используется как индикатор pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, вследствие чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике среды при ферментации выделяется больше кислот, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты, присутствующей в столбике.

Щелочная скошенная часть красного цвета и кислая жёлтая реакция в столбике после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В результате pH в соответствующей области не возвращается к исходному значению, и скошенная часть, и столбик приобретают кислую реакцию.

Образование газа выявляют по появлению трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Углекислый газ обозначается формулой CO₂.

Тиосульфат восстанавливается некоторыми видами бактерий до сероводорода. H₂S взаимодействует с ионами железа в солях железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

TSI следует использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном — Urea Agar/Broth, коды M112, GM112 и M111 — для различения видов Salmonella и Proteus.

Интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются глюкоза и сахароза; либо глюкоза и лактоза; либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Пузырьки или трещины: образование газа.
• Чёрный осадок: образование H₂S.

Тип образца

Чистый бактериальный изолят из:

• воды;
• пищевых продуктов;
• клинического образца.

Отбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

Для пищевых продуктов и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам для исследования пищевых продуктов и молока.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности и ограничения применения

Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального использования.

При работе с продуктом необходимо:

• прочитать маркировку перед вскрытием контейнера;
• использовать защитные перчатки;
• использовать защитную одежду;
• использовать средства защиты глаз;
• использовать средства защиты лица;
• соблюдать правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами;
• соблюдать стандартные меры предосторожности при работе с клиническими образцами;
• обращаться к соответствующим паспортам безопасности для ознакомления с требованиями безопасности.

Ограничения метода

Некоторые представители Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительную реакцию на H₂S в трёхсахарном железном агаре. Некоторые бактерии могут образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на TSI. Это возможно вследствие того, что утилизация сахарозы в TSI подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Контроль качества

Внешний вид

Сыпучий гранулированный порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной среды образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 6,45 % при 25 °C.

• pH: 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при температуре 35–37 °C в течение 18–24 ч.