Сухая питательная среда Агар HiEncap™ Мюллера-Хинтона HiMedia EC173D-10NO (10 шт.) производства HiMedia поставляется в капсулах по 19 г, каждая из которых рассчитана на приготовление 500 мл среды. Среда предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам методом диффузии в агар и рекомендована для тестирования чистых культур.

Назначение и область применения

Среду применяют для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам методом диффузии в агар с использованием бумажных дисков. Тип исследуемого материала — клинические изоляты.

Среда Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для этой цели появились другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время его используют для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам.

Для тестирования чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы агар Мюллера—Хинтона с 5 % овечьей крови и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для достижения заданных характеристик среды. Состав приведён на 1 л.

$ Эквивалент настоя из говядины.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия

Настой HM B и Acicase™ обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.

Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это контролируют по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT). Концентрации ионов кальция и магния скорректированы в соответствии с рекомендациями CLSI для получения корректных значений МИК при тестировании аминогликозидов и Pseudomonas aeruginosa.

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии противомикробных веществ из пропитанных препаратом бумажных дисков в агар. Для метода используют диски с одной концентрацией противомикробного препарата; диаметры зон задержки роста сопоставляют со значениями МИК. CLSI рекомендует агар Мюллера—Хинтона для диффузии противомикробных препаратов из бумажных дисков через агаровый гель.

Среда характеризуется воспроизводимостью результатов между партиями, низким содержанием ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина и поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий. Для среды накоплены данные и опыт применения при тестировании чувствительности. Партия стандартизирована с учётом действующего документа CLSI M6 по протоколам оценки сухого агара Мюллера—Хинтона.

Приготовление среды

1. Суспендируйте одну капсулу в 500 мл дистиллированной или очищенной воды либо две капсулы в 1000 мл воды.
2. Нагрейте до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 psi (≈0,10 МПа).
4. Охладите до 45–50 °C и тщательно перемешайте.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика определения чувствительности

1. Приготовьте стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма.
2. Равномерно распределите суспензию тампоном по всей поверхности среды.
3. Разместите на поверхности среды бумажные диски, пропитанные заданными количествами противомикробных препаратов.
4. Инкубируйте посевы.
5. Измерьте зоны задержки роста вокруг дисков.
6. Определите чувствительность, сопоставив результаты с критериями CLSI.

На результат диско-диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулюма, pH среды и продукция исследуемыми микроорганизмами β-лактамаз.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чистых культур.
• Плотность инокулюма влияет на размер зоны задержки роста: избыточное количество инокулюма может уменьшить зону, а недостаточное — увеличить её.
• Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
• Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
• Для медленно растущих микроорганизмов диско-диффузионный метод с агаром Мюллера—Хинтона не подходит: увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и неточным результатам.
• Необходимы правильные условия хранения дисков с антибиотиками, поскольку нарушение хранения может снизить их активность.
• Результаты определения чувствительности in vitro в некоторых случаях могут не совпадать с результатами in vivo.

Контроль качества

Внешний вид: желатиновая капсула с гранулированной средой кремового или жёлтого цвета.

Количество: одна капсула содержит 19 г среды, достаточных для приготовления 500 мл.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем из агара в концентрации 1,7 %.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция: для водного раствора с концентрацией 3,8 % (м/об) при 25 °C; pH 7,3 ± 0,1. Указанный диапазон pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики