Агар HiEncap™ Luria-основа, Miller's модификация HiMedia EC1726D-10NO (10 шт.)

Сухая питательная среда Агар HiEncap™ Luria-основа, Miller's модификация HiMedia EC1726D-10NO (10 шт.) производства HiMedia предназначена для приготовления 500 мл среды из одной капсулы. Среда применяется для культивирования и поддержания рекомбинантных штаммов Escherichia coli, с добавлением глюкозы или без неё; некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост из-за различий в пищевых потребностях.

Назначение

Среда рекомендована для культивирования и поддержания рекомбинантных штаммов Escherichia coli. Возможна работа с добавлением глюкозы или без неё. Тип образца — рекомбинантные штаммы E. coli.

Состав

Формула среды скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Принцип действия

Среда основана на исходной рецептуре Миллера для роста и поддержания штаммов E. coli, применяемых в молекулярной микробиологии. Luria Agar Base, Miller — питательная среда для выращивания чистых культур рекомбинантных штаммов.

E. coli выращивают в LB-бульоне до поздней логарифмической фазы. Некоторые плазмидные векторы способны реплицироваться до высокого числа копий без селективной амплификации; другие векторы реплицируются менее свободно и требуют селективной амплификации. Хлорамфеникол может применяться для ингибирования синтеза компонентов клетки-хозяина и, как следствие, предотвращения репликации бактериальной хромосомы.

Содержание хлорида натрия в модификации Miller составляет одну десятую от его содержания в рецептуре LB-агара Lennox и одну двадцатую — в рецептуре Miller. Это позволяет подбирать оптимальную концентрацию соли для конкретного штамма. При необходимости среду можно асептически дополнить глюкозой.

Триптон служит источником пептидов и пептонов, дрожжевой экстракт — витаминов группы B. Хлорид натрия обеспечивает ионы натрия для мембранного транспорта и поддерживает осмотическое равновесие среды. Агар используется как гелеобразователь.

Приготовление среды

1. Суспендируйте одну капсулу, содержащую 15,25 г среды, в 500 мл дистиллированной или очищенной воды. Для приготовления 1000 мл используйте две капсулы.
2. Нагревайте до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 psi (≈0,10 МПа).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости добавьте стерилизованный фильтрованием 20%-ный раствор глюкозы: 5 мл на 500 мл среды или 10 мл на 1000 мл.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

• Внешний вид: желатиновая капсула с гранулированной средой кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем из 1,5 % агара.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель жёлтого или янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.
• Количество: 15,25 г среды в капсуле; одной капсулы достаточно для приготовления 500 мл среды.
• Реакция: для водного раствора с концентрацией 3,05 % масс./об. при 25 °C — pH 7,0 ± 0,2.
• pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после инкубации в течение 18–24 ч при 35–37 °C. В 500 мл среды EC1726D добавляют 5 мл 20%-ного раствора декстрозы.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

Обращение с образцами и меры предосторожности

При работе с образцами рекомбинантных штаммов соблюдайте установленные правила обращения с лабораторными образцами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Перед вскрытием контейнера прочитайте маркировку. Используйте защитные перчатки, одежду, очки и средства защиты лица. При работе с образцами и культурами соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности. Дополнительные указания по безопасности приведены в паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост из-за различий в пищевых потребностях.
• Для полной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт в плотно закрытом контейнере при 10–30 °C. Приготовленную среду храните при 20–30 °C. Используйте до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия храните продукт в сухом месте, плотно закрывая контейнер. Продукт гигроскопичен; при неправильном хранении возможно образование комков. Храните в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и соблюдении рекомендованных условий хранения.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо обезвредить автоклавированием и/или сжиганием. При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.