Нитратный HiVeg бульон HiMedia MV439-500G — питательная среда на растительной основе для определения способности бактерий восстанавливать нитраты. Рекомендуется для дифференциации и идентификации различных типов бактерий, в частности семейства Enterobacteriaceae; состав и критерии эффективности соответствуют стандарту ISO 7932:1993.

Принцип измерения

Определение основано на способности бактерий восстанавливать нитрат калия, который служит субстратом в среде. В зависимости от вида микроорганизма нитрат может быть восстановлен до нитритов, аммиака или газообразного азота.

Присутствие нитритов выявляется с помощью реакции Гриесса: при добавлении сульфаниловой кислоты и $\alpha$-нафтиламина образуется красный диазониевый краситель (p-сульфобензол-азо-$\alpha$-нафтиламин), что свидетельствует о восстановлении нитрата до нитрита. Если окрашивание отсутствует, это означает, что нитрат либо не восстанавливался, либо был восстановлен далее до аммиака или азота. Для проверки добавляют щепотку цинковой пыли: цинк восстанавливает остаточный нитрат до нитрита, вызывая появление красного цвета. Отсутствие окрашивания после добавления цинка подтверждает полное восстановление нитрата.

Использование растительных пептонов в серии HiVeg™ исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией), так как среда не содержит компонентов животного происхождения.

Методика проведения анализа

1. Подготовка пробы: в пробирку с культурой добавляют по несколько капель сульфаниловой кислоты (R015) и раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).
2. Интерпретация: появление отчетливого красного или розового цвета указывает на восстановление нитрата.
3. Контроль: необходимо протестировать стерильную (непосевную) пробирку с бульоном.
4. Подтверждение: при отсутствии розового цвета добавляют щепотку цинковой пыли. Если цвет остается бесцветным, нитрат был полностью восстановлен.

Примечание: при быстром росте и активном восстановлении нитрата тест следует проводить на ранних этапах инкубации, так как нитриты могут быть быстро восстановлены до азота.

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 9,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть до полного растворения компонентов.
3. Разлить по пробиркам, колбам или другим емкостям.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Технические характеристики

Основные параметры

• Назначение: определение восстановления нитратов бактериями
• Вес: 500 г
• Физическая форма: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный раствор
• pH (при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2 (диапазон 6,80–7,20)
• Тип продукта: HiVeg™ (без компонентов животного происхождения)
• Материал упаковки: ПЭНП (HDPE)

Состав (г/л)

Эквивалентно экстракту говядины

Культуральные характеристики

Инкубация при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитратов оценивается после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).

Ключ: (*) соответствующие номера WDCM; (#) ранее известный как Enterobacter aerogenes.

Область применения

Среда используется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов. Применяется в микробиологических лабораториях для идентификации грамотрицательных бактерий.

Ограничения и предостережения

• Тест на восстановление нитратов не является подтверждающим; полная идентификация должна включать морфологию, окраску по Граму, биохимические и серологические тесты.
• Избыток цинковой пыли может привести к ложноотрицательному результату.
• При использовании $\alpha$-нафтиламина цвет положительной реакции может быстро блекнуть.
• Среда очень чувствительна; необходимо проверять стерильный контроль на отсутствие нитритов перед использованием.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 15–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, требует плотного закрытия крышки для предотвращения комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.