Питательная микробиологическая среда HiMedia MV439-500G Нитратный HiVeg бульон — сухой порошок на основе растительных пептонов для определения восстановления нитрата бактериями. Применяется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов; результат оценивают по реакции сульфаниловой кислоты и α-нафтиламина с обязательным использованием неинокулированного контроля.

Назначение

Нитратный HiVeg бульон предназначен для выявления способности бактерий восстанавливать нитрат. Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 7932:1993.

Среда используется для дифференциации и идентификации различных бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae. Для неферментирующих и других грамотрицательных палочек характерна различная способность восстанавливать нитраты. Некоторые микроорганизмы осуществляют денитрификацию — восстановление нитрата до газообразного азота.

Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является дифференцирующим признаком. Нитратный тест не является подтверждающим: полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, окраски по Граму, биохимические и серологические тесты.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности. Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Среда HiVeg приготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с BSE/TSE — губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный бульон приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной Обществом американских бактериологов в издании «Исследование чистых культур бактерий». Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитрата бактериями.

Некоторые бактерии превращают нитрат в:

• нитрит;
• аммиак;
• газообразный азот.

Наличие нитрита выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009. Появление красно-фиолетового окрашивания обусловлено образованием красного диазокрасителя — п-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — и указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не развивается, это означает, что нитрат либо не восстановлен, либо был восстановлен далее — до аммиака или газообразного азота. Для проверки в пробирку добавляют щепотку цинковой пыли:

• цинк восстанавливает оставшийся нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания;
• появление красного окрашивания указывает на наличие нитрата, который ранее не был восстановлен;
• отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата и его дальнейшее восстановление до соединений, находящихся ниже нитрита в цепи восстановления.

Таким образом, восстановление нитрата подтверждается либо наличием конечного катаболического продукта, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Реакция известна как реакция Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до азота.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 9,00 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте среду для полного растворения.
3. Разлейте среду по пробиркам, колбам или другим подходящим ёмкостям.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Методика выявления восстановления нитрата

1. После инкубации культуры добавьте в пробирку по несколько капель каждого реагента: сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009.
2. Отчётливое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
3. Одновременно исследуйте контрольную неинокулированную пробирку.
4. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте в исследуемую пробирку щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.

Для оценки культуральных характеристик инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитрата определяют после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты R015 и 0,5 мл раствора α-нафтиламина R009.

Тип образца

Изолированные микроорганизмы из:

• клинических образцов;
• неклинических образцов.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее вид был известен как Enterobacter aerogenes.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета, без комков.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор