Питательная микробиологическая среда HiMedia MV439-100G Нитратный HiVeg бульон — порошковый бульон с нитратом калия для выявления восстановления нитратов бактериями. Среда применяется для анализа выделенных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов; нитратредукция не является подтверждающим тестом и требует дополнительных морфологических, биохимических и серологических исследований.

Назначение

Нитратный HiVeg бульон предназначен для выявления восстановления нитратов бактериями. Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 7932:1993.

Среда используется для исследования выделенных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов. Применение включает дифференциацию и идентификацию различных бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae.

Состав

Состав приведён для приготовления среды, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности. Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Среда приготовлена на основе пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, поэтому не содержит компонентов, связанных с рисками BSE/TSE — губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивных губчатых энцефалопатий.

Принцип выявления нитратредукции

Нитратный бульон приготовлен по формуле, опубликованной в руководстве Общества американских бактериологов по исследованию чистых культур бактерий. Нитратредукция имеет значение для дифференциации и идентификации бактерий.

Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые представители этой группы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитратов бактериями. Некоторые бактерии превращают нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Для выявления нитрита в исследуемую пробу добавляют по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009. Образование красно-фиолетового окрашивания вследствие формирования красного диазокрасителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не появляется, это означает, что нитрат либо не восстановлен, либо восстановлен дальше — до аммиака или газообразного азота. Результат проверяют добавлением в пробирку щепотки цинковой пыли:

• цинк восстанавливает оставшийся нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания;
• появление красного окрашивания указывает на присутствие нитрата, который ранее не был восстановлен;
• отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата и его дальнейшее восстановление до соединений, находящихся ниже нитрита в цепи восстановления.

Таким образом, восстановление нитратов подтверждается либо присутствием конечного продукта катаболизма, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители семейства Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен дальше — до газообразного азота.

Методика приготовления среды

1. Приостановите 9,00 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте смесь для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам, колбам или другим подходящим ёмкостям.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Методика определения нитратредукции

1. Внесите в пробирку с исследуемой культурой несколько капель раствора сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009.
2. Появление отчётливого красного или розового окрашивания указывает на восстановление нитрата.
3. Одновременно исследуйте контрольную пробирку без инокулята.
4. Если розовое окрашивание не появляется, добавьте в пробирку щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
5. Отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на то, что нитрат был восстановлен дальше нитрита.

Для оценки нитратредукции используют по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты R015 и 0,5 мл раствора α-нафтиламина R009.

Тип образца

• Выделенные микроорганизмы из клинических образцов.
• Выделенные микроорганизмы из неклинических образцов.

Технические характеристики

• Назначение изделия: бульон
• Масса: 100 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20
• Условия хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Условия хранения приготовленной среды: 15–30 °C

Контроль качества

• Внешний вид: порошок от кремового до жёлтого цвета, однородный, сыпучий.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-янтарного цвета в пробирках.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 0,9 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Нитратредукцию определяют после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты R015 и 0,5 мл раствора α-нафтиламина R009.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее микроорганизм обозначался как Enterobacter aerogenes.

Хранение и срок годности

• Храните сухой продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленную среду храните при температуре