Дифференциальная питательная среда Фенилаланиновый бульон с малонатом HiMedia M781-100G (среда Шоу и Кларка) для идентификации грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae. Применяется для определения способности микроорганизмов утилизировать малонат и дезаминировать фенилаланин с образованием фенилпировиноградной кислоты.
Принцип измерения
Среда разработана по методике Шоу и Кларка для дифференциации грамотрицательных кишечных бактерий. В составе среды дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы питательными веществами, а фосфаты поддерживают pH-баланс. Хлорид натрия поддерживает осмотическое давление.
Индикатором pH служит бромтимоловый синий. Бактерии, способные утилизировать малонат (например, Klebsiella и Salmonella arizonae), вызывают щелочную реакцию, в результате чего цвет среды меняется со светло-зелёного на тёмно-синий. Если микроорганизмы не утилизируют малонат, цвет среды остаётся светло-зелёным.
Представители групп Proteus и Providencia способны дезаминировать фенилаланин до пировиноградной кислоты. Эта реакция выявляется путём добавления нескольких капель 10 % раствора хлорида железа (III) FeCl3, растворенного в подкисленной дистиллированной воде, в свежевыращенную культуру. При образовании пировиноградной кислоты из фенилаланина развивается тёмно-зелёное окрашивание.
Методика проведения анализа
- Подготовьте среду: суспендируйте 11,03 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
- Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
- Разлейте среду по пробиркам и стерилизуйте в автоклаве при 115 °C в течение 10 минут.
- После инкубации культуры сначала оцените результат утилизации малоната по изменению цвета среды.
- Для определения дезаминирования фенилаланина добавьте в пробирку несколько капель 10 % раствора хлорида железа (III) FeCl3 в подкисленной дистиллированной воде.
Технические характеристики
Состав, г/л:
| Компонент | г/л |
|---|
| Экстракт дрожжей | 1,000 |
| Малонат натрия | 3,000 |
| DL-Фенилаланин | 2,000 |
| Сульфат аммония | 2,000 |
| Фосфат калия двунатрия | 0,600 |
| Фосфат калия однонатрия | 0,400 |
| Хлорид натрия | 2,000 |
| Бромтимоловый синий | 0,025 |
| Конечный pH (при 25 °C) | 6,3 ± 0,2 |
Дополнительные параметры:
| Параметр | Значение |
|---|
| Происхождение компонентов | Без использования компонентов животного происхождения (микробное) |
| Тип продукта | Стандартный |
| Физическая форма | Порошок |
| Материал упаковки | ПНД (HDPE) |
| Сертификат | ФСЗ 2009/03705 |
Контроль качества
- Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от светло-жёлтого до светло-зелёного цвета.
- Цвет и прозрачность готовой среды: прозрачный раствор желтовато-зелёного цвета без осадка.
- Реакция: pH 6,3 ± 0,2 для 1,1 % (масса/объём) водного раствора при 25 °C.
- Диапазон pH: 6,10–6,50.
Культуральные характеристики
Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Малонат | Фенилаланин |
|---|
| Escherichia coli ATCC 25922 | 50–100 | обильный | отрицательная реакция | отрицательная реакция |
| Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 | 50–100 | обильный | положительная реакция, тёмно-синий цвет | отрицательная реакция |
| Proteus mirabilis ATCC 25933 | 50–100 | обильный | отрицательная реакция | положительная реакция, зелёное окрашивание после добавления 10 % FeCl3 |
| Providencia alcalifaciens ATCC 9886 | 50–100 | обильный | отрицательная реакция | положительная реакция, зелёное окрашивание после добавления 10 % FeCl3 |
| Salmonella Arizonae ATCC 13314 | 50–100 | обильный | положительная реакция, тёмно-синий цвет | отрицательная реакция |
| Salmonella Typhimurium ATCC 14028 | 50–100 | обильный | отрицательная реакция | отрицательная реакция |
Условия эксплуатации и хранения
- Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C.
- Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
- Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.