HiMedia M689-500G Декарбоксилазный бульон Мёллера с аргинином

Микробиологическая сухая питательная среда HiMedia M689-500G Декарбоксилазный бульон Мёллера с аргинином производства HiMedia предназначена для дифференциации бактерий по способности декарбоксилировать L-аргинин гидрохлорид. Среда применяется для идентификации грамотрицательных кишечных палочек, а инокулированные пробирки необходимо защищать от воздуха слоем стерильного минерального масла.

Назначение

Декарбоксилазный бульон Мёллера с аргинином рекомендован для дифференциации бактерий на основании их способности декарбоксилировать L-аргинин гидрохлорид.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Назначение: бульон для микробиологических и биохимических исследований.

Диагностическое применение: для исследований in vitro.

Состав

Состав, г/л:

Итоговый pH при 25 °C: 6,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Эквивалент мясного экстракта.

Принцип действия и интерпретация

Декарбоксилазный бульон Мёллера с аргинином используют для дифференциации грамотрицательных кишечных палочек по способности декарбоксилировать L-аргинин гидрохлорид.

Декарбоксилазный бульон был введён Мёллером для выявления образования лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы и аргининдегидролазы. До работ Мёллера бактериальные декарбоксилазы аминокислот исследовали Gale, а также Gale и Epps. Декарбоксилазные среды также рекомендуются стандартными методами идентификации бактерий.

Пептон HM B и пептон обеспечивают бактерии азотистыми питательными веществами. Декстроза служит ферментируемым углеводом, а пиридоксаль — коферментом фермента декарбоксилазы. Бромкрезоловый пурпурный и крезоловый красный являются индикаторами pH.

При внесении в среду бактерий, ферментирующих декстрозу, pH снижается вследствие образования кислоты, поэтому цвет индикатора изменяется с пурпурного на жёлтый.

Образовавшаяся кислота стимулирует фермент декарбоксилазу. Аргинин сначала гидролизуется до орнитина, который затем декарбоксилируется с образованием путресцина. Образование амина путресцина повышает pH среды, вследствие чего цвет индикатора изменяется с жёлтого на пурпурный.

Если микроорганизм не продуцирует соответствующий фермент, среда остаётся кислой и имеет жёлтый цвет. Каждый исследуемый изолят также следует инокулировать в пробирку с базальной средой без аминокислоты.

После инкубации в декарбоксилазном тесте могут наблюдаться два слоя различного цвета — жёлтый и пурпурный. Перед интерпретацией результатов пробирку следует осторожно встряхнуть.

Инокулированные пробирки необходимо защищать от воздуха слоем стерильного минерального масла. Воздействие воздуха может вызвать ощелачивание поверхности среды, что делает результат теста недействительным.

Приготовление среды и проведение анализа

1. Суспендируйте 20,52 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 10 мин.
5. Охладите среду в пробирках, установив пробирки вертикально.
6. Инокулируйте пробирки исследуемыми микроорганизмами.
7. Нанесите поверх среды 2–3 мл стерильного минерального масла.

Для каждого исследуемого изолята дополнительно используйте пробирку с базальной средой без аминокислоты.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными методическими рекомендациями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

• Инокулированные пробирки необходимо защищать от воздуха слоем стерильного минерального масла.
• Воздействие воздуха может вызвать ощелачивание поверхности среды и сделать тест недействительным.
• Для корректной интерпретации результатов каждый исследуемый изолят следует также высевать в базальную среду без аминокислоты.
• При наличии двух слоёв разного цвета пробирку необходимо осторожно встряхнуть перед оценкой результата.

Контроль качества

Внешний вид сухой среды: однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до зеленовато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор пурпурного цвета без осадка.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,05 % масса/объём при 25 °C.

pH: 6,0 ± 0,2.

Диапазон pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение до 4 суток; инокулированные пробирки покрывают стерильным минеральным маслом.