Глюкозо-солевой бульон с типолем HiMedia M621-500G (уп/500 гр)

Бульонная питательная среда Глюкозо-солевой бульон с типолем HiMedia M621-500G (уп/500 гр) с конечным pH 8,8±0,2. Среда предназначена для обогащения Vibrio parahaemolyticus и морских изолятов из пищевых продуктов, включая морепродукты, с селективным подавлением грамположительных микроорганизмов типолем.

Назначение

Глюкозо-солевой бульон с типолем предназначен для обогащения Vibrio parahaemolyticus из морепродуктов и других пищевых продуктов, а также для количественного определения бактерий методом наиболее вероятного числа (МВЧ, MPN).

Продукт применяется для работы с клиническими образцами и пищевыми пробами.

• Клинические образцы: кал, мазки из ран.
• Пищевые образцы: продукты питания, включая морепродукты.

Содержание хлорида натрия 3 % способствует обогащению галофильного Vibrio parahaemolyticus. Типол подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

Состав

Состав среды приведён для приготовления 1 л.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными параметрами эффективности. Компонент HM peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип действия и интерпретация

Пептон и пептон HM B обеспечивают среду необходимыми азотистыми питательными веществами. Высокая концентрация хлорида натрия способствует обогащению галофильного Vibrio parahaemolyticus. Глюкоза используется микроорганизмами в процессе роста, а типол ингибирует рост грамположительных организмов.

Vibrio parahaemolyticus — грамотрицательная морская бактерия, вызывающая у человека гастроэнтерит пищевого происхождения.

Исследуемый образец следует хранить при умеренном охлаждении, примерно при 7–10 °C, и анализировать как можно скорее после отбора. Это способствует сохранению и восстановлению Vibrio и снижает вероятность чрезмерного роста естественной морской микрофлоры.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 48,0 г части A в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 4,0 мл части B.
2. Осторожно нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам в необходимом объёме.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов, ориентировочно ≈0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите приготовленную среду до 45–50 °C.

Пробоподготовка и проведение анализа

1. Взвесьте 50 г образца морепродуктов и перенесите в блендер.
2. Добавьте 450 мл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) и гомогенизируйте образец в течение 1 мин при 8000 об/мин. Полученная суспензия соответствует разведению 1:10.
3. При необходимости приготовьте в PBS разведения 1:100, 1:1000, 1:10000 или более высокие разведения.
4. Внесите по 10 мл разведения 1:10 в каждую из трёх пробирок, содержащих по 10 мл обогатительной среды — глюкозо-солевого бульона с типолем двойной концентрации. Три порции соответствуют навеске образца массой 1 г.
5. Аналогичным образом внесите 10 мл в пробирку с обогатительной средой одинарной концентрации.
6. Если предполагается высокое содержание Vibrio parahaemolyticus, исследование можно начинать с разведения продукта 1:10.
7. Инкубируйте глюкозо-солевой бульон с типолем в течение ночи при 35±2 °C.
8. Из верхнего 1 см бульона, в котором наблюдается рост, отберите петлёй культуру и выполните штриховой посев на агар TCBS (M189).
9. Инкубируйте агар TCBS в течение ночи при 35±2 °C.
10. На агаре TCBS колонии Vibrio parahaemolyticus имеют круглую форму, зелёную или голубовато-зелёную окраску и диаметр 2,3 мм.
11. Колонии Vibrio alginolyticus имеют больший размер и жёлтую окраску.
12. Проведите дальнейшую идентификацию колоний биохимическими методами.
13. Для биохимической идентификации Vibrio parahaemolyticus, Vibrio cholerae и Vibrio vulnificus инокулируйте соответствующие положительные контрольные микроорганизмы.
14. После подтверждения, что голубовато-зелёные колонии относятся к Vibrio parahaemolyticus, определите исходное положительное разведение в обогатительном бульоне и примените таблицы МВЧ для трёх пробирок для окончательного количественного определения микроорганизма.

Контроль качества

Внешний вид

• Часть A: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Часть B: бесцветная вязкая жидкость.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Раствор жёлтого цвета, прозрачный, с очень небольшим количеством осадка.

Реакция среды

Реакция водного раствора концентрацией 4,8 % масс./об. с типолем концентрацией 0,4 % при 25 °C.

• pH: 8,8±0,2.

Диапазон pH

pH: 8,60–9,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Назначение изделия: бульон.
• Конечный pH при 25 °C: 8,8±0,2.
• Диапазон pH: 8,60–9,00.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706.
• Методические документы: МР 02.009-06, Саратов, 2006.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 15–25 °C.
• Ёмкость: плотно закрытая.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон следует плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии. Продукт гигроскопичен; попадание влаги может привести к образованию комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывать ёмкость. Эффективность среды обеспечивается при использовании в течение установленного срока годности.

Меры предосторожности

Среда предназначена