HiMedia M621-100G Глюкозо-солевой Teepol бульон (Twin pack)

Питательная микробиологическая среда HiMedia M621-100G Глюкозо-солевой Teepol бульон (двойная упаковка) — бульон для обогащения Vibrio parahaemolyticus и морских изолятов из пищевых продуктов с конечным pH 8,8 ± 0,2. Среда применяется для выделения и количественного определения вибрионов методом наиболее вероятного числа; высокое содержание хлорида натрия составляет 3 %, а Teepol подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

Назначение

Глюкозо-солевой Teepol бульон предназначен для обогащения Vibrio parahaemolyticus и морских изолятов из пищевых продуктов. Среда также применяется для количественного определения бактерий методом наиболее вероятного числа (НВЧ).

Vibrio parahaemolyticus — грамотрицательная морская бактерия, вызывающая у человека гастроэнтерит пищевого происхождения.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик. HM-пептон B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип действия и интерпретация

Пептон и HM-пептон B обеспечивают среду необходимыми азотистыми питательными веществами. Высокая концентрация хлорида натрия — 3 % — способствует обогащению галофильного Vibrio parahaemolyticus. Глюкоза используется микроорганизмами, а Teepol подавляет рост грамположительных организмов.

Исследуемую пробу следует хранить при умеренном охлаждении — примерно при 7–10 °C — и анализировать как можно скорее после отбора. Это повышает вероятность выживания и восстановления Vibrio и снижает риск избыточного роста естественной морской микрофлоры.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 48,0 г части A в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 4,0 мл части B.
2. Осторожно нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам в необходимом объёме.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов-силы на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите приготовленную среду до 45–50 °C.

Типы образцов

• Клинические образцы: кал, мазок из раны.
• Пищевые образцы.

Отбор и подготовка образцов

1. Взвесьте 50 г образца морепродуктов и поместите в блендер.
2. Добавьте 450 мл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) и гомогенизируйте 1 мин при 8000 об/мин. Полученная суспензия соответствует разведению 1:10.
3. Приготовьте в PBS разведения 1:100, 1:1000, 1:10000 или более высокие разведения при необходимости.
4. Внесите три порции по 10 мл разведения 1:10 в три пробирки, содержащие по 10 мл обогащающего бульона — глюкозо-солевого Teepol бульона двойной концентрации. Такая проба соответствует навеске 1 г.
5. Аналогичным образом внесите 10 мл в обогащающий бульон однократной концентрации.
6. Если ожидается высокое содержание Vibrio parahaemolyticus, исследование можно начинать с разведения продукта 1:10.
7. После ночной инкубации глюкозо-солевого Teepol бульона при 35 ± 2 °C возьмите петлёй культуру из верхнего 1-сантиметрового слоя бульона с признаками роста и выполните штриховой посев на тиосульфат-цитрат-жёлчно-сахарозный агар (TCBS), M189.
8. После ночной инкубации при 35 ± 2 °C колонии Vibrio parahaemolyticus на агаре TCBS имеют круглую форму, зелёную или голубовато-зелёную окраску и диаметр 2,3 мм.
9. Колонии Vibrio alginolyticus имеют больший размер и жёлтую окраску.
10. Выполните дальнейшую идентификацию колоний с помощью биохимической характеристики.
11. Для биохимической идентификации Vibrio parahaemolyticus, Vibrio cholerae и Vibrio vulnificus необходимо инокулировать соответствующие контрольные положительные организмы.
12. После окончательной идентификации голубовато-зелёных колоний как Vibrio parahaemolyticus определите исходное положительное разведение в обогащающем бульоне и используйте таблицы НВЧ для трёх пробирок для окончательного количественного определения микроорганизма.

Контроль качества

Внешний вид

• Часть A: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Часть B: бесцветная вязкая жидкость.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Жёлтый прозрачный раствор с очень небольшим количеством осадка.

Реакция среды

Реакция водного раствора концентрацией 4,8 % масс./об. с 0,4 % Teepol при 25 °C.

• pH: 8,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 8,60–9,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

• Температура хранения продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения продукта: в плотно закрытой ёмкости.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–25 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения комкования из-за гигроскопичности.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать ёмкость.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Меры предосторожности

• Для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием ёмкости прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Руководствуйтесь требованиями