HiMedia M439S-500G Нитратный бульон

Сухая питательная среда HiMedia M439S-500G Нитратный бульон для дифференциации и идентификации бактерий, в частности семейства Enterobacteriaceae. Применяется для определения способности микроорганизмов восстанавливать нитраты, а также для подсчета количества Bacillus cereus методом посева на чашки при 30 °C согласно рекомендациям ISO.

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный бульон используется для определения способности бактерий восстанавливать нитраты, что является важным дифференциальным признаком. Процесс восстановления нитратов обычно представляет собой анаэробное дыхание, при котором организм использует нитрат в качестве источника кислорода.

Представители семейства Enterobacteriaceae характерно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит вступает в реакцию с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином, в результате чего образуется красный цвет (реакция Грисса).

Особенности интерпретации:

• Неферментирующие и другие разнообразные грамотрицательные бациллы различаются по своей способности восстанавливать нитраты. Некоторые из них способны к денитрификации (восстановлению нитрата до газообразного азота N₂).
• Для глюкозоферментирующих грамотрицательных бацилл образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным тестом.
• Если организм растет быстро и активно восстанавливает нитрат, тест следует проводить после короткого периода инкубации, так как нитрит может быть далее восстановлен до азота.

Методика проведения анализа

Приготовление реагентов для нитратного теста

1. Сульфаниловая кислота: растворить 8 г сульфаниловой кислоты в 1 л 5 N уксусной кислоты.
2. Реагент альфа-нафтиламина: растворить 5 г альфа-нафтиламина в 1 л 5 N уксусной кислоты.

Процедура анализа

1. В пробирку с исследуемой культурой добавить по несколько капель каждого реагента.
2. Появление отчетливого красного или розового цвета указывает на восстановление нитрата.
3. Результат необходимо зафиксировать в течение 5–10 секунд, так как цвет исчезает при стоянии.
4. Обязательно протестировать контрольную (непосеянную) пробирку.
5. Если розовый цвет не образовался, добавить щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.

Важное примечание: Восстановление нитрата не является подтверждающим тестом. Полная идентификация должна включать морфологический анализ, определение реакции по Граму, биохимические и серологические тесты. Избыток цинка может привести к ложноотрицательной реакции.

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 39 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения среды.
3. Разлить по пробиркам.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 ± 0,2
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий раствор
• Форма выпуска: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Происхождение компонентов: животное

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухого порошка: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.