HiMedia M439S-500G Нитратный бульон

Питательная микробиологическая среда HiMedia M439S-500G Нитратный бульон — порошкообразный препарат для приготовления 1000 мл среды из 39 г. Нитратный бульон применяют для определения восстановления нитратов бактериями, включая дифференциацию представителей семейства Enterobacteriaceae; готовую среду хранят при 2–8 °C, а сухой препарат — при температуре ниже 30 °C.

Назначение и область применения

Нитратный бульон используют для выявления способности микроорганизмов восстанавливать нитраты. Метод применяют для дифференциации и идентификации различных видов бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae.

Среда также рекомендована для подсчёта колоний Bacillus cereus методом подсчёта колоний при 30 °C. Формула среды подготовлена в соответствии с опубликованным составом для исследований чистых культур бактерий и модифицирована с учётом требований Бюро индийских стандартов (BIS).

Состав

Состав на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности среды.

Принцип измерения и интерпретация реакции

Нитратное восстановление обычно представляет собой анаэробное дыхание, при котором микроорганизм получает кислород из нитрата.

Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки отличаются способностью восстанавливать нитраты. Некоторые представители этой группы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Представители семейства Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит взаимодействует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Эта реакция называется реакцией Грисса.

При быстром росте микроорганизма и активном восстановлении нитрата исследование следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку образовавшийся нитрит может подвергнуться дальнейшему восстановлению до азота.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 39 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Приготовление реагентов для нитратного теста

Раствор сульфаниловой кислоты

Растворите 8 г сульфаниловой кислоты в 1 л 5 N уксусной кислоты.

Реагент α-нафтиламина

Растворите 5 г α-нафтиламина в 1 л 5 N уксусной кислоты.

Проведение нитратного теста

1. Внесите по несколько капель каждого реагента в пробирку с исследуемой культурой.
2. Оцените окрашивание: отчётливое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
3. Зарегистрируйте результат в течение 5–10 с, поскольку окрашивание постепенно исчезает при выдерживании.
4. Одновременно исследуйте контрольную незасеянную пробирку.
5. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
6. При интерпретации учитывайте, что избыточное количество цинка может привести к ложноотрицательной реакции.

Восстановление нитрата не является подтверждающим тестом. Полная идентификация должна включать оценку морфологии, реакции по Граму, биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках образуется прозрачный раствор светло-янтарного цвета или раствор от прозрачного до слегка опалесцирующего.

Реакция среды

Реакция: для 3,9% водного раствора при 25 °C.

pH: 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Храните сухой препарат при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.

Приготовленную среду храните при 2–8 °C.

Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Техническое отличие от других нитратных сред

Состав включает 30,000 г/л хлорида натрия, 1,000 г/л нитрата калия, пептический перевар животной ткани и мясной экстракт; результат восстановления нитрата выявляют по реакции Грисса с образованием красного или розового окрашивания.

Совместимость с реагентами

Для проведения нитратного теста используются:

• сульфаниловая кислота, растворённая в 5 N уксусной кислоте: 8 г/л;
• α-нафтиламин, растворённый в 5 N уксусной кислоте: 5 г/л;
• цинковая пыль для подтверждения отсутствия нитрата при отсутствии розового окрашивания.