HiMedia M439S-100G Нитратный бульон

Порошковая питательная среда HiMedia M439S-100G Нитратный бульон с содержанием нитрата калия 1,000 г/л. Среда предназначена для определения восстановления нитратов и дифференциации бактерий, включая представителей семейства Enterobacteriaceae; конечный pH составляет 7,0 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение и принцип действия

Нитратный бульон применяют для определения способности микроорганизмов восстанавливать нитраты, что используется при дифференциации и идентификации различных видов бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae.

Формула среды подготовлена в соответствии с рецептурой, опубликованной в работе «Исследование чистых культур бактерий» Общества американских бактериологов; модифицированная формула рекомендована Бюро индийских стандартов (BIS). Международный комитет по стандартизации рекомендовал нитратный бульон для количественного определения Bacillus cereus методом подсчёта колоний при 30 °C.

Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые представители этой группы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для ферментирующих глюкозу грамотрицательных палочек образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Восстановление нитратов обычно представляет собой анаэробное дыхание, при котором микроорганизм получает кислород из нитрата. Представители семейства Enterobacteriaceae характерно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит вступает в реакцию с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест проводят после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может восстанавливаться далее до азота.

Состав

Формула рассчитана на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 39 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление по исходной методике — 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа или 1,03 бар.

Реактивы для нитратного теста

Приготовление раствора сульфаниловой кислоты

Растворите 8 г сульфаниловой кислоты в 1 л 5-нормального раствора уксусной кислоты.

Приготовление реактива α-нафтиламина

Растворите 5 г α-нафтиламина в 1 л 5-нормального раствора уксусной кислоты.

Методика определения восстановления нитратов

1. Внесите по несколько капель каждого реактива в пробирку с исследуемой культурой.
2. Чёткое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
3. Зафиксируйте результат в течение 5–10 с, поскольку окрашивание постепенно исчезает при выдерживании.
4. Проведите такой же тест с контрольной незасеянной пробиркой.
5. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте небольшое количество цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
6. Учитывайте, что избыточное количество цинка может привести к ложноотрицательной реакции.

Восстановление нитратов не является подтверждающим тестом. Полная идентификация должна включать оценку морфологии, окраску по Граму, биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид сухой среды: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий раствор светло-янтарного цвета, образующийся в пробирках.

Реакция: реакция 3,9 % масс./об. водного раствора при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Артикул: M439S-100G
• Назначение изделия: бульон
• Масса: 100 г
• Конечный pH: 7,0 ± 0,2 при 25 °C
• Температура: 10–30 °C

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C
• Условия хранения: в плотно закрытой ёмкости
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке

Сравнительное техническое отличие

Нитратный бульон предназначен именно для выявления восстановления нитрата с визуальной регистрацией реакции Грисса; положительная реакция сопровождается образованием красного окрашивания в течение 1–2 мин для приведённых контрольных культур.