Питательная диагностическая среда Нитратный бульон HiMedia M439-500G (уп/500 гр) производства HiMedia — порошковый бульон для определения восстановления нитратов бактериями. Нитратный бульон применяется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов, при этом тест на восстановление нитратов не является подтверждающим и требует дополнительных морфологических, тинкториальных, биохимических и серологических исследований.

Назначение

Среда рекомендована для выявления восстановления нитратов бактериями. Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 7932:1993. Среда также применяется по рекомендациям ISO для определения нитратредуцирующих бактерий и подсчёта Bacillus cereus.

Тип питательной среды: диагностическая
Назначение изделия: бульон
Форма выпуска: порошок
Фасовка: 500 г
Регистрационное удостоверение: ФСЗ 2009/03705
Происхождение компонентов: животное

Состав

Среда для определения нитратов по ISO 7932:1993

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Нитратная среда M439

HM-пептон B эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 9,00 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду в пробирки, колбы или другую подходящую лабораторную посуду.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Принцип определения

Нитратный бульон приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной в руководстве Society of American Bacteriologist «Pure Culture Study of Bacteria».

Способность микроорганизмов восстанавливать нитраты используется для дифференциации и идентификации различных бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae. Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые микроорганизмы осуществляют денитрификацию — восстанавливают нитраты до газообразного азота. Для ферментирующих глюкозу грамотрицательных палочек образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитратов бактериями. Отдельные виды бактерий преобразуют нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Наличие нитритов выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009. Развитие красно-фиолетового окрашивания вследствие образования красного диазониевого красителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не развивается, это означает, что нитрат либо не был восстановлен, либо подвергся дальнейшему восстановлению до аммиака или газообразного азота. Для проверки в пробирку добавляют щепотку цинковой пыли. Цинк восстанавливает нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания.

• Красное окрашивание после добавления цинковой пыли указывает на присутствие нитрата, который ранее не был восстановлен.
• Отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата; следовательно, нитрат был восстановлен до соединений, расположенных далее нитрита в цепи восстановления.

Таким образом, восстановление нитратов подтверждается либо наличием конечного продукта катаболизма, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Данная реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, анализ следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до газообразного азота.

Методика проведения анализа

1. В пробирку с культурой, подлежащей исследованию, добавьте несколько капель каждого реагента: сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009.
2. Отчётливое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
3. Параллельно исследуйте контрольную незасеянную пробирку.
4. Если розовое окрашивание не появляется, добавьте в пробирку щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
5. Для количественной оценки восстановления нитратов при контроле культуральных характеристик добавьте по 0,5 мл сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009.
6. Оцените развитие красно-розового окрашивания в течение 1–2 мин, если это предусмотрено контрольной реакцией.

Исследуемый материал

Тип образца: изолированные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор светло-янтарного цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция 0,9 % масс./об. водного раствора при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитратов оценивают после добавления по 0,5 мл сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009.

• Соответствующие номера WDCM.

Ранее использовалось название Enterobacter aerogenes.

Ограничения и мешающие факторы

• Восстановление нитратов не является подтверждающим тестом. Полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, реакции по Граму, биохимические и серологические исследования.
• Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При проведении теста на восстановление нитратов с α-нафтиламином окрашивание положительной реакции может быстро исчезать.
• Тест на нитраты обладает высокой чувствительностью. Незасеян