Порошковая питательная среда HiMedia M439-100G Нитратный бульон для микробиологического определения восстановления нитрата. Применяется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов; рабочая среда имеет pH 7,0 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Нитратный бульон предназначен для выявления восстановления нитрата бактериями, включая дифференциацию и идентификацию представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда применяется для исследования изолированных микроорганизмов, полученных из клинических и неклинических образцов.

Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 7932:1993.

Состав

Нитратная среда по спецификации ISO 7932:1993

Формула рассчитана и стандартизирована для соответствия установленным параметрам эффективности.

Нитратная среда M439

Мясной экстракт эквивалентен компоненту HM peptone B.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 9,00 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки, колбы или другую подходящую лабораторную посуду.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Принцип определения и интерпретация

Нитратный бульон приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной Обществом американских бактериологов в руководстве по исследованию чистых культур бактерий. Способность микроорганизмов восстанавливать нитрат используется для дифференциации и идентификации различных бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae.

Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые микроорганизмы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитрата бактериями. Некоторые бактерии преобразуют нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Наличие нитрита выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009). Появление красно-фиолетового окрашивания вследствие образования красного диазокрасителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не появляется, это означает, что нитрат либо не восстановлен, либо восстановлен дальше — до аммиака или газообразного азота. Результат проверяют добавлением в пробирку щепотки цинковой пыли. Цинк восстанавливает нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания.

• Красное окрашивание после добавления цинковой пыли указывает на присутствие нитрата, который не был восстановлен ранее.
• Отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата и его дальнейшее восстановление до соединений, находящихся ниже нитрита в цепи восстановления.

Таким образом, восстановление нитрата подтверждается либо наличием конечного продукта катаболизма, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители семейства Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Реакция носит название реакции Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест следует выполнять после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до газообразного азота.

Методика проведения теста

1. Добавьте в пробирку с исследуемой культурой по несколько капель раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009).
2. Оцените окрашивание среды: отчётливое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
3. Одновременно исследуйте контрольную неинокулированную пробирку.
4. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте в пробирку щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.

Ограничения и мешающие факторы

• Восстановление нитрата не является подтверждающим тестом. Полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, окраски по Граму, биохимические и серологические тесты.
• Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При выполнении теста с α-нафтиламином окрашивание положительной реакции может быстро исчезать.
• Нитратный тест отличается высокой чувствительностью. Неинокулированный нитратный контроль следует исследовать с реагентами для определения отсутствия нитрита в среде.

Технические характеристики

• Наименование: Нитратный бульон
• Артикул: M439-100G
• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: бульон
• Физическая форма: порошок
• Вес: 100 г
• Происхождение: животного происхождения
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: HDPE
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• pH приготовленной среды: 6,80–7,20
• Внешний вид сухой среды: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-янтарного цвета в пробирках
• Концентрация раствора для определения реакции: 0,9 % масс./об.
• Температура определения реакции: 25 °C

Характеристики среды по данным производителя

Культуральные характеристики и контроль качества

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитрата определяют после добавления 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора α-нафтиламина (R009).

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее микроорганизм был известен как Enterobacter aerogenes.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытая ёмкость.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон.
• Среда гигроскопична; нарушение условий хранения может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Оценка эффективности

Эффективность среды ожидается при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

Сравнительный технический контекст

Восстановление нитрата с помощью нитратного бульона позволяет выявлять не только образование нитрита, но и дальнейшее восстановление нитрата до аммиака или газообразного азота; для дифференциации этих вариантов применяется дополнительная реакция с цинковой пылью.