Минимальный бульон Дэвиса с декстрозой HiMedia M389-500G (уп/500 гр)

Микробиологическая питательная среда Минимальный бульон Дэвиса с декстрозой HiMedia M389-500G (уп/500 гр) — химически определённый порошковый бульон. Среда предназначена для выделения и характеристики питательных мутантов Escherichia coli; перед применением 11,6 г среды растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и стерилизуют автоклавированием при 121 °C в течение 15 мин.

Назначение

Минимальный бульон Дэвиса с декстрозой применяется для выделения и характеристики питательных мутантов Escherichia coli. Минимальные среды содержат только необходимые питательные вещества для роста диких штаммов E. coli и могут дополняться аминокислотами, витаминами, нуклеиновыми кислотами и другими веществами в зависимости от исследуемого питательного фактора.

Среда предназначена для:

• выделения питательных мутантов Escherichia coli, полученных после воздействия ультрафиолетового излучения на культуры дикого типа;
• изучения питательных свойств мутантов;
• выявления потребности мутантов в определённых аминокислотах, витаминах, нуклеиновых кислотах и других соединениях;
• выделения мутантов Bacillus subtilis с использованием методов случайного выделения и пенициллиновой селекции.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Питательные мутанты Escherichia coli получают воздействием ультрафиолетового излучения на клетки дикого типа. Для роста таких мутантов требуется питательно полноценная среда. Минимальную среду дополняют необходимыми веществами, после чего по наличию или отсутствию роста оценивают потребность мутантов в соответствующем питательном факторе.

Минимальные среды представляют собой составы Дэвиса, описанные Ледербергом. В состав входят только необходимые для роста диких штаммов E. coli питательные вещества. Мутанты, полученные из облучённых культур дикого типа, могут быть выделены методом случайной изоляции. Дополнительно мутанты выделяют с применением пенициллина по методике Дэвиса и Ледерберга. Мутанты Bacillus subtilis могут выделяться с использованием этих методов, включая пенициллиновую селекцию.

Функции компонентов среды:

• декстроза служит источником энергии;
• дикалийфосфат и монокалийфосфат обеспечивают буферные свойства среды;
• сульфат магния и сульфат аммония являются источниками ионов, участвующих в метаболизме.

Набор добавок к минимальной среде зависит от типа исследуемого мутанта. Для скрининга могут использоваться аминокислоты, витамины, нуклеиновые кислоты и другие вещества. Добавки вводят, например, в виде казаминовых кислот для определения витаминов с триптофаном, смеси водорастворимых витаминов, дрожжевых экстрактов или экстрактов нуклеиновых кислот.

Методика выделения и идентификации мутантов

1. Получают клеточную суспензию дикого типа Escherichia coli и подвергают её ультрафиолетовому облучению.
2. Культивируют облучённую суспензию на минимальном агаре M512, дополненном всеми необходимыми для роста компонентами.
3. Выращивают на этой среде клетки дикого типа — прототрофы — и мутантные клетки.
4. Отобранные колонии переносят в минимальный бульон Дэвиса и в минимальный бульон Дэвиса, дополненный необходимыми факторами роста.
5. Инкубируют посевы при 35 °C в течение 24 ч.
6. Интерпретируют результат: рост в минимальном бульоне с добавленным фактором роста при отсутствии роста в базовом минимальном бульоне указывает на наличие мутанта, дефектного по соответствующему питательному фактору.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 11,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте приготовленную среду автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа, и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте среду.
5. Разлейте среду по необходимым ёмкостям.

Контроль качества

Внешний вид

Белый или кремовый однородный сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Бесцветный прозрачный раствор в пробирках.

Реакция среды

Реакция водного раствора концентрацией 1,16 % масс./об. при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Наименование среды: Минимальный бульон Дэвиса с декстрозой
• Артикул: M389-500G
• Фасовка: 500 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Реакция 1,16 % водного раствора при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин
• Условия стерилизации по давлению: 15 фунтов, примерно 0,103 МПа

Хранение и срок годности

• Хранение сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Регистрационные данные

• Производитель: HiMedia
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707
• Назначение изделия: бульон

Техническое отличие от минимальных сред общего назначения

В отличие от неспецифических питательных бульонов, состав M389 задан химически определённой рецептурой Дэвиса с декстрозой и предусматривает возможность целевого дополнения среды факторами роста для выявления питательных мутантов.