HiMedia M389-100G Минимальный бульон, Дэвис

Питательная среда HiMedia M389-100G Минимальный бульон, Дэвис — химически определённый порошковый бульон для микробиологических исследований. Применяется для выделения и характеристики питательных мутантов Escherichia coli; готовая среда имеет pH 7,0 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Минимальный бульон Дэвиса предназначен для выделения и характеристики питательных мутантов Escherichia coli. Минимальную среду можно дополнять аминокислотами, витаминами, нуклеиновыми кислотами и другими веществами для изучения соответствующих питательных свойств мутантов.

Среда также применяется для выделения мутантов Bacillus subtilis методами случайного выделения и селекции с использованием пенициллина.

Состав

Состав на 1 л:

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик среды.

Принцип действия и интерпретация

Питательные мутанты Escherichia coli, полученные после воздействия ультрафиолетового излучения на клетки дикого типа, нуждаются для роста в питательной среде с полным набором необходимых компонентов.

Минимальные среды Дэвиса содержат только питательные вещества, необходимые для роста штаммов дикого типа Escherichia coli. Минимальную среду можно дополнять выбранными компонентами для изучения конкретных питательных свойств мутантов.

При случайном выделении, проводимом по методу Ледерберга, питательные мутанты получают из облучённых культур дикого типа Escherichia coli. Мутанты также можно выделять с использованием пенициллина по методу Дэвиса и Ледерберга. Аналогичные методы, включая пенициллиновую технику, применяют для выделения мутантов Bacillus subtilis.

Функции компонентов среды:

• Декстроза: источник энергии.
• Дикалийфосфат и монокалийфосфат: буферная система среды.
• Сульфат магния и сульфат аммония: источники ионов, имитирующих метаболические условия.

Набор питательных добавок к минимальной среде выбирают в зависимости от типа выявляемого мутанта. В качестве добавок могут использоваться аминокислоты, витамины, нуклеиновые кислоты и другие вещества. Для этого применяют казаминовые кислоты для анализа витаминов с триптофаном, смесь водорастворимых витаминов, дрожжевые экстракты или экстракты нуклеиновых кислот.

Методика выделения питательных мутантов

1. Суспензию клеток дикого типа Escherichia coli облучают ультрафиолетовым излучением.
2. Облучённую суспензию культивируют на минимальном агаре M512, дополненном всеми необходимыми факторами роста. На этой стадии обеспечивается рост как клеток дикого типа — прототрофов, так и клеток-мутантов.
3. Выбранные колонии переносят в минимальный бульон Дэвиса и в минимальный бульон Дэвиса, дополненный необходимыми факторами роста.
4. Инкубируют посевы при 35 °C в течение 24 ч.
5. Рост в минимальном бульоне, дополненном факторами роста, при отсутствии роста в минимальном бульоне без добавок указывает на наличие мутанта по соответствующему питательному фактору.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 11,6 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте и разлейте приготовленную среду в необходимые ёмкости.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от белого до кремового цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Бесцветный прозрачный раствор в пробирках.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 1,16 % масс./об. при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Тип продукта: стандартный.
• Химический состав: химически определённая среда.
• Форма выпуска: порошок.
• Фасовка: 100 г.
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE).
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.
• Температура хранения сухой среды: ниже 30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Условия хранения

Храните сухую среду в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до истечения срока годности, указанного на этикетке.