Лизин-декарбоксилазный бульон без пептона HiMedia M376I-500G (уп/500 гр)

Лизин-декарбоксилазный бульон без пептона HiMedia M376I-500G (уп/500 г) — сухая питательная среда для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae. Применяется для отличия Salmonella arizonae от группы Bethesda Ballerup, а также для идентификации Yersinia enterocolitica в соответствии со стандартами ISO 6579-1:2017 и ISO 10273:2003.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для определения активности лизин-декарбоксилазы. В начале инкубации микроорганизмы ферментируют декстрозу с образованием кислоты, что приводит к изменению цвета индикатора бромкрезол пурпурного на жёлтый. При последующей инкубации, если L-лизин декарбоксилируется до кадаверина, происходит щелочная реакция, и цвет среды возвращается к пурпурному.

• Положительная реакция: пурпурный цвет (лизин декарбоксилирован).
• Отрицательная реакция: жёлтый цвет (лизин не декарбоксилирован).
• Отсутствие реакции: отсутствие изменения цвета (декстроза не используется).

Модификация Тейлора (удаление пептона) исключает ложноположительные результаты, вызываемые Citrobacter freundii и его параколонами. В отличие от сред Мёллера, данная среда не требует специальных анаэробных условий и низкого pH.

Область применения

Среда используется для анализа следующих типов образцов:

• Пищевые продукты и мясо;
• Молоко и молочные продукты;
• Корма для животных;
• Фекалии животных.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 9,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть до полного растворения.
3. Разлить по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладить пробирки в вертикальном положении до 45–50 °C.
6. Покрыть поверхность среды слоем стерильного минерального масла (2–3 мл).

Процедура подтверждения по ISO 6579-1:2017

1. Предварительное обогащение: Образцы (25 г в 225 мл) помещают в буферный пептонный бульон (M1494I) и инкубируют при 34–38 °C в течение 18 $\pm$ 2 ч.
2. Селективное обогащение: 0,1 мл предварительно обогащенного образца инокулируют в 10 мл бульона RVS (M1448I) или агар MSRV (M1428I) (инкубация при 41,5 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч), а также в бульон MKTTn (M1496I) (инкубация при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч). Для Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi A используют бульон с селенитом цистином (инкубация при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч и 48 $\pm$ 3 ч).
3. Изоляция: Посев на висмуто-сульфитный агар (BS) (M027) и модифицированный XLD-агар (M031I). Инкубация при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч (рекомендуется дополнительная инкубация еще на 24 $\pm$ 3 ч).
4. Подтверждение: Инокулируют среду чуть ниже поверхности жидкости. Инкубируют при 37 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч. Пурпурный цвет и помутнение указывают на положительную реакцию.

Процедура подтверждения по ISO 10273:2003

1. Обогащение: Образец гомогенизируют в бульоне PSB (M941I) (разведение 1/10), инкубируют при 22–25 °C от 2 до 5 суток. Вторым этапом используют бульон ITC (M1220) (разведение 1/100), инкубация при 25 °C в течение 48 ч.
2. Изоляция: Посев культур PSB на CIN-агар (инкубация при 30 °C, 24–48 ч) после возможной щелочной обработки (0,5 мл культуры в 4,5 мл раствора KOH), а также посев культур ITC на SSDC-агар (инкубация при 30 °C, 24–48 ч).
3. Очистка: Штрих выделенных колоний на питательный агар (M561A), инкубация при 30 °C в течение 24 ч.
4. Подтверждение: Инокулируют среду чуть ниже поверхности. Если пробирки не заполнены полностью, поверхность покрывают расплавленным вазелиновым маслом или стерильным жидким парафином. Инкубируют при 30 °C в течение 24 ч. Фиолетовый цвет — положительная реакция, жёлтый — отрицательная.

Технические характеристики

Состав (согласно ISO 6579-1 и ISO 10273:2003)

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: светло-жёлтый или зеленовато-жёлтый гомогенный порошок
• Цвет и прозрачность готовой среды: пурпурный прозрачный раствор без осадка
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Дополнительные параметры

Контроль качества и культуральные характеристики

Характеристики определены после инкубации при 37 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Использовать малые дозы инокулята.
• Не интерпретировать результаты ранее 24 часов инкубации; некоторым организмам может потребоваться до 4 суток.
• При работе с образцами и культурами соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности, использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.