Лизин-декарбоксилазный бульон без пептона HiMedia M376I-500G (уп/500 гр)

Питательная микробиологическая среда Лизин-декарбоксилазный бульон без пептона HiMedia M376I-500G (уп/500 гр) предназначена для выявления декарбоксилазы лизина и не содержит пептона. Лизин-декарбоксилазный бульон применяют для дифференциации представителей Enterobacteriaceae и подтверждения реакций при работе с пищевыми, молочными, мясными образцами, кормами и фекалиями животных; результаты не следует оценивать ранее чем через 24 ч инкубации.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для дифференциации Salmonella arizonae и группы Bethesda-Ballerup среди представителей семейства Enterobacteriaceae. Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 6579-1:2017. Среда также рекомендована ISO 10273:2003 для выявления Yersinia enterocolitica.

Типы исследуемых образцов:

• пищевые продукты и мясо;
• молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных.

Среда предназначена для микробиологических лабораторий, санитарно-бактериологического контроля пищевой продукции и ветеринарных исследований.

Состав

Спецификация среды декарбоксилирования лизина (LDC) по ISO 6579-1 и ISO 10273:2003:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Форма выпуска: порошок
• Происхождение: без компонентов животного происхождения, микробное
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПНД (HDPE, полиэтилен высокой плотности)

Принцип действия и интерпретация

Среды для определения декарбоксилаз были впервые описаны Moeller для выявления декарбоксилаз лизина и орнитина, а также аргининдигидролазы. Falkow разработал среду для определения декарбоксилазы лизина с целью идентификации и дифференциации Salmonella и Shigella. В модификации Taylor из состава среды Falkow исключён пептон; эта модификация выпускается под обозначением M376I. Удаление пептона устраняет ложноположительные результаты, вызываемые Citrobacter freundii и параколонами.

Модификация Taylor сохраняет преимущество среды Falkow перед средой Moeller: для проведения реакции не требуются специальные условия анаэробного культивирования и низкий pH.

На начальных этапах инкубации микроорганизмы ферментируют декстрозу с образованием кислоты, вследствие чего индикатор меняет цвет на жёлтый. При последующей инкубации декарбоксилирование L-лизина до кадаверина вызывает щелочную реакцию, и цвет индикатора изменяется обратно на фиолетовый. Если среда остаётся жёлтой, реакция на декарбоксилазу лизина отрицательная.

Положительную реакцию на декарбоксилазу лизина дают:

• S. Typhi;
• S. Paratyphi B;
• S. Paratyphi C;
• Salmonella Gallinarum;
• Salmonella pullorum.

Отрицательную реакцию на декарбоксилазу лизина даёт S. Paratyphi A.

Дрожжевой экстракт обеспечивает среду необходимыми питательными веществами для роста. Декстроза является ферментируемым углеводом, а бромкрезоловый пурпурный — индикатором pH. Микроорганизмы, не утилизирующие декстрозу, не вызывают изменения цвета среды.

Лизин-декарбоксилазный бульон без пептона также рекомендован APHA.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 9,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте среду до полного растворения.
3. Разлейте по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа).
5. Охладите пробирки с приготовленной средой до 45–50 °C в вертикальном положении.
6. Налейте поверх среды 2–3 мл стерильного минерального масла.

Пробоподготовка и проведение анализа по ISO 6579-1:2017

Предварительное обогащение

1. Поместите 25 г образца в 225 мл буферной пептонной воды M1494I.
2. Инкубируйте при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. Внесите 0,1 мл предварительно обогащённой пробы в 10 мл бульона RVS M1448I или на агар MSRV M1428I.
2. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Внесите 1 мл культуры в бульон MKTTn M1496I.
4. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Для Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi A выполните селективное обогащение в селенит-цистиновом бульоне.
6. Инкубируйте селенит-цистиновый бульон при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч и 48 ± 3 ч.

Выделение

1. Высейте полученную культуру на висмут-сульфитный агар (BS) M027.
2. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Рекомендуется дополнительная инкубация в течение ещё 24 ± 3 ч.
4. Одновременно выполните посев на модифицированный ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар (XLD) M031I.

Подтверждение

1. Выполните посев непосредственно под поверхность жидкой среды.
2. Инкубируйте при 37 °C в течение 24 ч ± 3 ч.
3. Мутность и фиолетовая окраска после инкубации указывают на положительную реакцию.
4. Жёлтая окраска указывает на отрицательную реакцию.

Проведение анализа по ISO 10273:2003

Обогащение

1. Для приготовления первой исходной суспензии внесите образец в известный объём бульона PSB M941I, чтобы получить разведение 1:10 по массе/объёму или объёму/объёму.
2. Гомогенизируйте суспензию в перистальтическом гомогенизаторе в течение 2 мин.
3. Инкубируйте при 22–25 °C в течение 2–3 суток при перемешивании или 5 суток без перемешивания.
4. Для приготовления второй исходной суспензии аналогичным образом используйте бульон ITC M1220, чтобы получить соотношение исследуемой порции к среде обогащения 1:100 по массе/объёму или объёму/объёму.
5. Инкубируйте при 25 °C в течение 48 ч.

Выделение

1. Выполните поверхностный посев культуры, полученной в бульоне PSB, на чашку с агаром CIN и инкубируйте при 30 °C в течение 24–48 ч.
2. Для щелочной обработки стерильной пипеткой перенесите 0,5 мл культуры PSB в 4,5 мл раствора KOH и перемешивайте ровно 20 с. Немедленно выполните посев на чашку с агаром CIN. Инку