HiMedia M376I-100G Лизиндекарбоксилазный бульон без пептона

Сухая питательная среда HiMedia M376I-100G Лизиндекарбоксилазный бульон без пептона предназначена для дифференциации энтеробактерий по способности декарбоксилировать лизин. Среда используется при исследовании пищевых продуктов, мяса, молока и молочных продуктов, кормов и фекалий животных; тесты не следует оценивать ранее 24 ч инкубации, поскольку некоторым микроорганизмам требуется до 4 суток.

Назначение

Лизиндекарбоксилазный бульон без пептона применяется для различения Salmonella arizonae и группы Bethesda–Ballerup семейства Enterobacteriaceae. Среда также рекомендована для выявления Yersinia enterocolitica по ISO 10273:2003.

Состав и показатели эффективности среды соответствуют ISO 6579-1:2017. Модификация Тейлора предусматривает удаление пептона из состава среды M376I, что устраняет ложноположительные реакции, вызываемые Citrobacter freundii и параколонами. В отличие от среды Мёллера, методика не требует специальных условий анаэробного культивирования и низкого значения pH.

Состав

Спецификация ISO 6579-1 и ISO 10273:2003 — среда декарбоксилирования лизина (LDC):

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия показателям эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Среды для определения декарбоксилаз впервые описаны Мёллером для выявления декарбоксилаз лизина и орнитина, а также аргининдигидролазы. Фалков разработал среду для определения декарбоксилазы лизина при идентификации и дифференциации Salmonella и Shigella. Позднее Тейлор модифицировал состав Фалкова, удалив пептон из рецептуры M376I.

На начальном этапе инкубации микроорганизмы ферментируют декстрозу с образованием кислоты, вследствие чего индикатор изменяет цвет на жёлтый. При последующей инкубации, если L-лизин декарбоксилируется до кадаверина, реакция становится щелочной, а цвет индикатора изменяется обратно на фиолетовый. Сохранение жёлтого цвета указывает на отрицательную реакцию декарбоксилазы лизина.

Положительную реакцию декарбоксилазы лизина дают:

• S. Typhi;
• S. Paratyphi B;
• S. Paratyphi C;
• Salmonella Gallinarum;
• Salmonella pullorum.

Отрицательную реакцию декарбоксилазы лизина даёт S. Paratyphi A.

Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Декстроза является ферментируемым углеводом, а бромкрезоловый пурпурный — индикатором pH. Микроорганизмы, не утилизирующие декстрозу, не вызывают изменения цвета среды.

Лизиндекарбоксилазный бульон без пептона также рекомендован APHA.

Пробоподготовка и типы образцов

Тип образца

• пищевые продукты и мясо;
• молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных.

Методика исследования по ISO 6579-1:2017

Предварительное обогащение

1. Внести 25 г образца в 225 мл буферной пептонной воды M1494I.
2. Инкубировать при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. Внести 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл бульона RVS M1448I или на агар MSRV M1428I.
2. Инкубировать при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Внести 1 мл культуры в бульон MKTTn M1496I.
4. Инкубировать при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Для Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi A выполнить селективное обогащение в селенит-цистиновом бульоне, затем инкубировать при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч и 48 ± 3 ч.

Выделение

1. Полученную культуру высеять на бисмут-сульфитный агар (BS) M027.
2. Инкубировать при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Рекомендуется дополнительная инкубация в течение 24 ± 3 ч.
4. Одновременно выполнить посев на модифицированный агар XLD M031I.

Подтверждение

1. Внести посевной материал непосредственно под поверхность жидкой среды.
2. Инкубировать при 37 °C в течение 24 ч ± 3 ч.
3. Помутнение и фиолетовая окраска после инкубации указывают на положительную реакцию.
4. Жёлтая окраска указывает на отрицательную реакцию.

Методика исследования по ISO 10273:2003

Обогащение

1. Для приготовления первой исходной суспензии внести образец в известный объём PSB-бульона M941I до получения разведения 1/10 по массе/объёму или объёму/объёму.
2. Гомогенизировать суспензию в перистальтическом гомогенизаторе в течение 2 мин.
3. Инкубировать при 22–25 °C в течение 2–3 суток при перемешивании или 5 суток без перемешивания.
4. Вторую исходную суспензию приготовить аналогичным образом в бульоне ITC M1220 до получения разведения образца в среде обогащения 1/100 по массе/объёму или объёму/объёму.
5. Инкубировать при 25 °C в течение 48 ч.

Выделение

1. Культуру, полученную в PSB-бульоне, высеять на поверхность чашки с агаром CIN и инкубировать при 30 °C в течение 24–48 ч.
2. Для щелочной обработки стерильной пипеткой перенести 0,5 мл культуры из PSB-бульона в 4,5 мл раствора KOH и перемешивать только 20 с.
3. Немедленно выполнить посев на чашку с агаром CIN и инкубировать при 30 °C в течение 24–48 ч.
4. Используя культуру из ITC-бульона, выполнить посев на поверхность чашки с агаром SSDC и инкубировать при 30 °C в течение 24–48 ч.

Очистка культуры

1. Отобранные колонии штриховым посевом перенести на поверхность питательного агара M561A.
2. Инкубировать при 30 °C в течение 24 ч.

Подтверждение

1. Внести посевной материал непосредственно под поверхность жидкой среды.
2. Если пробирки заполнены средой не полностью и не герметичны, покрыть поверхность расп