HiMedia M376I-100G Лизиндекарбоксилазный бульон без пептона

Лизиндекарбоксилазный бульон без пептона HiMedia M376I-100G — сухая питательная среда для дифференциации штаммов Salmonella arizonae и группы Bethesda Ballerup семейства Enterobacteriaceae. Применяется для идентификации Yersinia enterocolitica и других бактерий в соответствии со стандартами ISO 6579-1:2017 и ISO 10273:2003.

Область применения

Среда рекомендуется для анализа следующих типов образцов:

• пищевые продукты и мясо;
• молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных.

Принцип измерения

Определение основано на способности микроорганизмов декарбоксилировать L-лизин. В начале инкубации ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, из-за чего индикатор бромкрезоловый пурпурный меняет цвет на жёлтый. При последующей инкубации, если L-лизин декарбоксилируется до кадаверина, происходит щелочная реакция, и цвет среды возвращается к пурпурному. Если цвет остаётся жёлтым, реакция на декарбоксилазу лизина отрицательная.

Модификация среды по Тейлору (исключение пептона) позволяет устранить ложноположительные результаты, вызываемые Citrobacter freundii и параколонами, и не требует создания специальных анаэробных условий или низкого pH.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 9,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения.
3. Разлить по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладить пробирки в вертикальном положении до 45–50 °C.
6. Покрыть поверхность среды слоем стерильного минерального масла (2–3 мл).

Процедура подтверждения по ISO 6579-1:2017

1. Преобогащение: образцы (25 г в 225 мл) помещают в буферный пептонный бульон (M1494I), инкубируют при 34–38 °C в течение 18 $\pm$ 2 ч.
2. Селективное обогащение: 0,1 мл преобогащенного образца инокулируют в 10 мл бульона RVS (M1448I) или агар MSRV (M1428I) при 41,5 $\pm$ 1 °C (24 $\pm$ 3 ч), затем 1 мл культуры переносят в бульон MKTTn (M1496I) при 37 $\pm$ 1 °C (24 $\pm$ 3 ч). Для Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi A используют бульон с селенистым цистином (инкубация при 37 $\pm$ 1 °C через 24 $\pm$ 3 ч и 48 $\pm$ 3 ч).
3. Изоляция: посев на висмут-сульфитный агар (BS) (M027) и модифицированный XLD-агар (M031I), инкубация при 37 $\pm$ 1 °C (24 $\pm$ 3 ч, рекомендуется дополнительная инкубация ещё на 24 $\pm$ 3 ч).
4. Подтверждение: инокулируют среду чуть ниже поверхности жидкости. Инкубируют при 37 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч. Положительный результат: помутнение и пурпурный цвет. Отрицательный результат: жёлтый цвет.

Процедура подтверждения по ISO 10273:2003

1. Обогащение: образец гомогенизируют в бульоне PSB (M941I) до разведения 1/10, инкубируют при 22–25 °C от 2 до 5 дней. Вторым этапом используют бульон ITC (M1220) до разведения 1/100, инкубация при 25 °C в течение 48 ч.
2. Изоляция: посев культур PSB на агар CIN (инкубация при 30 °C, 24–48 ч) после предварительной щелочной обработки (0,5 мл культуры в 4,5 мл раствора KOH, перемешивание 20 с). Также используют посев культур ITC на агар SSDC (инкубация при 30 °C, 24–48 ч).
3. Очистка: штриховой посев выбранных колоний на питательный агар (M561A), инкубация при 30 °C в течение 24 ч.
4. Подтверждение: инокулируют среду чуть ниже поверхности. Если пробирки не заполнены полностью, поверхность покрывают расплавленным вазелиновым маслом или стерильным жидким парафином. Инкубируют при 30 °C в течение 24 ч. Положительный результат: фиолетовый цвет. Отрицательный результат: жёлтый цвет.

Технические характеристики

Состав (согласно ISO 6579-1 и ISO 10273:2003)

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: светло-жёлтый или зеленовато-жёлтый гомогенный порошок
• Цвет и прозрачность готовой среды: пурпурный прозрачный раствор без осадка
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после инкубации при 37 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания.

Ограничения и меры предосторожности

• Использовать малые дозы инокулята.
• Не интерпретировать результаты до истечения 24 часов инкубации; некоторым организмам может потребоваться до 4 суток.
• При работе с образцами и культурами соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности, использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.